[发明专利]一种抗衰老活性分子

摘要

本发明公开了一种抗衰老的活性分子——多球壳菌素(英文名：Myriocin，分子量401.54，CAS：35891‑70‑4)，首次公开此活性分子可延缓裂殖酵母细胞衰老。内容包括以下方面：a)多球壳菌素储液制备：将多球壳菌素配制成400μg/ml的储液；b)细胞培养：将裂殖酵母菌株活化接种于YES固体平板，培养2‑3天后制备饱和过夜培养液，取菌液稀释于含有Myriocin的YES液体培养基中培养；c)多球壳菌素延缓细胞衰老：取不同培养天数的菌液，加入Phloxin B染色，测定其存活率。本发明内容显示多球壳菌素是一种抗衰老活性分子，具有广阔的应用前景。

主权项

1.一种抗衰老活性分子——多球壳菌素，将多球壳菌素处理裂殖酵母细胞，显示多球壳菌素显著延缓了细胞衰老。内容包括以下方面：a)多球壳菌素储液制备：将多球壳菌素固体粉末5mg，加入5ml95％的乙醇做溶剂，65℃恒温水浴加热3-5min，使其充分溶解，得到1mg/ml的储液后，取1.5ml EP管，加入95％的乙醇600μl，加入1mg/ml的储液400μl，混匀，得到400μg/ml的储液，将得到的储液存放于-20℃保存；b)细胞培养：将所需的裂殖酵母菌株，接种于YES固体平板上，30℃培养2-3天，活化菌种；挑取菌落于装有YES液体培养基的大试管中培养过夜，得到饱和过夜培养液；向盛有25ml已灭菌的YES液体培养基的150ml三角瓶中加入多球壳菌素储液，使其终浓度为600ng/ml，另一瓶对照组加入95％的乙醇；稀释饱和过夜培养液加入到2只盛有25ml已灭菌的YES液体培养基的150ml三角瓶中，保证起始浓度为1×105cells/ml，即OD600＝0.01；30℃，220rpm培养，在特定时间点测定其存活率；c)多球壳菌素延缓细胞衰老：用分光光度计测定菌液OD600，取0.5OD600的菌液5000rpm离心3min，用无菌水洗涤细胞一次后加入1ml无菌水，加入1mg/ml的Phloxin B储液，使其终浓度为5μg/ml；于30℃摇床避光温育2h；用1×PBS将细胞洗涤3次，置于荧光显微镜下，检测并拍照，统计死活细胞比例，计算出存活率。