[发明专利]一种用于马铃薯茎段体胚高效再生及遗传转化的培养基及方法有效
| 申请号： | 201611020414.6 | 申请日： | 2016-11-14 |
| 公开（公告）号： | CN106636185B | 公开（公告）日： | 2019-10-25 |
| 发明（设计）人： | 邹雪;王西瑶;黄雪丽;余金龙;李立芹;倪甦;刘帆;余丽萍;彭洁;杨兰淅;唐晓;邸雪妮;邓孟胜 | 申请（专利权）人： | 四川农业大学 |
| 主分类号： | C12N15/82 | 分类号： | C12N15/82;A01H4/00 |
| 代理公司： | 广州三环专利商标代理有限公司 44202 | 代理人： | 张艳美;谢素 |
| 地址： | 611130 四*** | 国省代码： | 四川;51 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种用于马铃薯茎段体胚高效再生及遗传转化的培养基，所述培养基包括1.0mg/L的6‑BA、0.2mg/L的TDZ、0.05mg/L的2,4‑D，以及0.1mg/L的GA3；还涉及一种用于马铃薯茎段体胚高效再生及遗传转化的方法，包括步骤：(1)预培养；(2)农杆菌侵染和共培养；(3)筛选培养；以及(4)生根培养。本发明以取材广泛易得的马铃薯试管苗茎段为外植体，建立茎段的体胚高效再生及遗传转化的培养基，可获得90％～100％的芽分化效率，同时改进培养方式、调节农杆菌侵染浓度，提高了转化和筛选效率，经过30d左右的筛选即可获得大量转基因株系，整体所需周期大大缩短。 | ||
| 搜索关键词： | 高效再生 遗传转化 培养基 马铃薯茎 段体 农杆菌侵染 茎段 筛选 马铃薯试管苗 转基因株系 筛选培养 生根培养 外植体 芽分化 预培养 体胚 取材 转化 改进 | ||
【主权项】：
1.一种用于马铃薯茎段体胚高效再生及遗传转化的方法，其特征在于，运用马铃薯茎段体胚高效再生及遗传转化的培养基，所述培养基包括1.0 mg/L的6‑BA、0.2 mg/L的TDZ、0.05 mg/L的2,4‑D，以及0.1 mg/L的GA3，所述培养基包括预/共培养基、固体筛选培养基及液体筛选培养基，所述方法包括：（1）预培养，剪取马铃薯试管苗茎段，去除腋芽并剪成0.5~1cm作为外植体接种在预/共培养基中预培养2~4d；（2）农杆菌侵染和共培养，将所述茎段于一农杆菌菌液中侵染3~5min，用无菌水清洗后移至无菌滤纸上去掉多余水分，再接入垫有2~3层无菌滤纸的预/共培养基中，24℃黑暗共培养36h；（3）筛选培养，共培养后将所述茎段放入含100 mg/L Cef的无菌水中清洗3~4遍，吸掉多余水分后转入一固体筛选培养基中培养7d~14d，去除因农杆菌而过度生长的致死、污染和完全白化外植体，然后换入液体筛选培养基中继续培养，培养20d~40d后可分化出大量芽；（4）生根培养，剪下分化出的芽接入一生根筛选培养基中培养10d。
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