[发明专利]一种人原代肝细胞的分离及培养方法在审
| 申请号： | 201611032934.9 | 申请日： | 2016-11-15 |
| 公开（公告）号： | CN108070551A | 公开（公告）日： | 2018-05-25 |
| 发明（设计）人： | 不公告发明人 | 申请（专利权）人： | 江苏齐氏生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/071 | 分类号： | C12N5/071 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 214434 江苏省江阴市东盛*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种人原代肝细胞的分离及培养方法，包括以下步骤：(1)无菌条件下切取新鲜人肝组织，4℃密封运回实验室；(2)将组织放入预冷无菌含双抗的PBS缓冲液中洗涤数次除去血液、结缔组织；(3)预热的PBS缓冲液针刺法灌洗；(4)预热的HBSS缓冲液针刺法灌洗；(5)预热的GBSS混合酶液针刺法灌洗；(6)剪碎组织用GBSS混合酶液消化，离心，弃上清；(7)取细胞滤液用锥虫蓝染色检测细胞活性；(8)细胞计数后用完全培养基重悬接种到包被后的培养瓶，置于37℃、5％CO2环境中培养；(9)细胞形态鉴定；(10)ELISA法检测；(11)RT‑PCR检测。本发明提供的一种人肝细胞的分离及培养方法，操作简单，所得细胞数量多，成活率高，是一种理想的人原代肝细胞分离与培养方法，为实验提供可靠的细胞资源。 | ||
| 搜索关键词： | 人原代肝细胞 预热的 针刺法 灌洗 混合酶液 细胞 完全培养基 结缔组织 染色检测 人肝细胞 人肝组织 无菌条件 细胞活性 细胞滤液 细胞形态 缓冲液 培养瓶 包被 放入 剪碎 切取 双抗 无菌 预冷 重悬 锥虫 成活率 洗涤 接种 密封 消化 血液 检测 新鲜 | ||
【主权项】：
1.一种人原代肝细胞的分离及培养方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)无菌条件下切取新鲜人肝组织，4℃密封运回实验室；(2)将组织放入预冷无菌含双抗的PBS缓冲液中洗涤数次除去血液、结缔组织；(3)预热的PBS缓冲液针刺法灌洗；(4)预热的HBSS缓冲液针刺法灌洗；(5)预热的GBSS混合酶液针刺法灌洗；(6)剪碎组织用GBSS混合酶液消化，离心，弃上清；(7)取细胞滤液用锥虫蓝染色检测细胞活性；(8)细胞计数后用完全培养基重悬接种到包被后的培养瓶，置于37℃、5％CO2 环境中培养；(9)细胞形态鉴定；(10)ELISA法检测；(11)RT-PCR检测。
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