[发明专利]真菌基因定点插入突变的近原位回补方法有效
| 申请号： | 201611041330.0 | 申请日： | 2017-03-14 |
| 公开（公告）号： | CN107043778B | 公开（公告）日： | 2021-08-17 |
| 发明（设计）人： | 陈保善;卢姗;李茹;沈笑瑞 | 申请（专利权）人： | 广西大学 |
| 主分类号： | C12N15/80 | 分类号： | C12N15/80;C12N15/65 |
| 代理公司： | 广西南宁公平知识产权代理有限公司 45104 | 代理人： | 杨立华 |
| 地址： | 530004 广西壮族*** | 国省代码： | 广西;45 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种真菌基因定点插入突变的近原位回补方法，将修饰过的互补基因片段和U6启动子驱动携带抗性基因特异识别序列的sgRNA表达盒与根癌农杆菌T‑质粒整合，构建以诺尔丝菌素为抗性筛选标记的根癌农杆菌介导的病原真菌基因定点互补载体；用该互补载体转化病原真菌基因插入失活突变体的孢子，依赖该突变体所携带的Cas9对靶标位点进行切割，从而实现将互补基因片段准确插入突变体的抗性基因靶标序列。发明人将该法应用于甘蔗鞭黑穗菌Δmfa2、prf或g827突变株实现了互补DNA片段的准确定点插入，使目标基因功能恢复，具有简易性、高效性和准确性，为研究病原真菌功能基因组学提供了重要工具。 | ||
| 搜索关键词： | 真菌 基因 定点 插入 突变 原位 方法 | ||
【主权项】：
一种真菌基因定点插入突变的近原位回补方法，其特征在于：将靶标位点经过碱基更改但氨基酸序列不变的互补基因片段和U6启动子驱动携带抗性基因特异识别序列的sgRNA表达盒与根癌农杆菌T‑质粒整合，构建以诺尔丝菌素为抗性筛选标记的根癌农杆菌介导的病原真菌基因定点互补载体；用该互补载体转化病原真菌基因插入失活突变体的孢子，依赖突变体内所携带的Cas9对靶标位点进行切割，从而实现将互补基因片段准确插入突变体的抗性基因靶标位点。
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