[发明专利]一种采用蛋白质比对鉴定栝楼籽的方法

摘要

本发明公开了一种采用蛋白质比对鉴定栝楼籽的方法，步骤是：A、栝楼籽蛋白质提取：称取栝楼籽，倒入预冷研钵，在液氮中研磨成粉末；B、将粉末转入到离心管中，加入蛋白提取液；C、加入等体积的Tris‑饱和酚，冰浴，振荡，混匀；D、样品放入低温离心机，离心，取酚相，酚相收集到离心管中；E、向酚相中加入乙酸铵甲醇溶液，混匀，离心，弃上清，沉淀用乙酸铵甲醇溶液洗涤，获得蛋白质干粉；F、栝楼籽蛋白质电泳：得到的样本蛋白质干粉，加入等量的裂解液进行裂解后，采用Bradford法测定每个样本的蛋白质含量，进行考马斯亮蓝染色，并脱色，采集图像，对比蛋白胶特征条带，进行栝楼籽鉴定，该方法易行，操作简便，节省检测时间。

主权项

1.一种采用蛋白质比对鉴定栝楼籽的方法，其特征在于，其步骤是：栝楼籽蛋白质提取：称取0.5g 栝楼籽样本，倒入预冷研钵，在液氮中研磨成粉末，以研磨到奶粉状；将粉末转入到离心管中，加入2－4倍体积蛋白质提取液，所述的蛋白质提取液为500mMTris，50MmEDTA, 700mM蔗糖，100mMKCl,PH8.0，振荡28－32min，混匀；加入等体积的Tris‑饱和酚，冰浴，振荡28－32min，混匀；样品放入低温离心机，离心温度为4℃，转速为12000rpm，离心28－32min，取酚相，余下的沉淀和液体再加入Tris‑饱和酚，重复本步骤1－2次，酚相收集到同一离心管中；向酚相中加入2－4倍体积的0.1M乙酸铵甲醇溶液，混匀，见白色絮状沉淀，并在‑20℃沉淀过夜后样品放入低温离心机，离心温度为4℃，转速为12000rpm，离心28－32min，弃上清，沉淀用0.1M乙酸铵甲醇溶液洗涤，离心温度为4℃，转速为12000rpm，离心14－16min，弃上清，重复本步骤1－2次，沉淀用预冷丙酮洗涤，离心温度为4℃，转速为12000rpm，离心14－16min，弃上清，重复本步骤1－2次，将样品离心管敞口，室温下放置28－32min，得到的沉淀冷冻干燥后置‑80℃下保存备用，获得蛋白质干粉；栝楼籽蛋白质电泳：将得到的蛋白质干粉，加入等量的裂解液进行裂解后，采用Bradford法测定每个样本的蛋白质含量，按照等量的蛋白量在预制好的蛋白质电泳胶上上样，80V电泳至电泳条带进入分离胶，120V至显色液跑出分离胶，进行考马斯亮蓝染色，并脱色，采集图像，通过比较分析蛋白胶进行栝楼籽鉴定；栝楼籽鉴定：通过对比栝楼籽的蛋白质带：45kD－66 kD之间的蛋白条带，30 kD－45 kD之间的蛋白条带，以及20 kD－30 kD之间的两个蛋白条带为栝楼籽蛋白质条带，鉴定栝楼籽。