[发明专利]利用细胞表面分子标志物鉴定人类原态多能性的方法

摘要

本发明涉及一种利用细胞表面分子ALPPL2鉴定人类态多能性的方法。步骤是：建立可诱导的2代重编程系统，利用特定的诱导培养体系从人的成纤维细胞中分别建立态及primed态iPSC系；分别提取所建立的态及primed态iPSCs中的细胞膜蛋白，通过iTRAQ标记及蛋白质谱定量技术，对两者的膜蛋白进行系统比较分析，筛选出相比于primed iPSCs，中高表达的膜蛋白库；3.在及primed重编程过程中分别选取特定时间节点进行细胞收样，结合RNAseq分析，获得及primed重编程过程转录组的动态变化，并将在重编程过程中特异性上调的基因与步骤2中筛选出的膜蛋白库进行综合比较。本发明找到了可特异指征人的态多能性的表面分子标志物ALPPL2。

主权项

1.一种利用细胞表面分子ALPPL2鉴定人类态多能性的方法，其特征在于：该方法包括下述步骤：A、建立可诱导的2代重编程系统，利用特定的诱导培养体系从人的成纤维细胞中分别建立态及primed态iPSC系；B、分别提取所建立的态及primed态iPSCs中的细胞膜蛋白，通过iTRAQ标记及蛋白质谱定量(iTRAQ-LC/MS)技术，对两者的膜蛋白进行系统比较分析，筛选出相比于primediPSCs，中高表达的膜蛋白库(fold change>1.5)；C、在及primed重编程过程中分别选取特定时间节点进行细胞收样，结合RNAseq分析，获得及primed重编程过程转录组的动态变化，并将在重编程过程中特异性上调的基因与步骤B中筛选出的膜蛋白库进行综合比较；根据分析，所获得的态细胞表面分子标志物须具备以下两个指标：1)在而非primed iPSC或人成纤维细胞的细胞膜表面高表达；2)相比于primed重编程过程，其在态重编程过程中该蛋白对应的基因表达水平逐渐升高，并在终态中具有较高的RNA表达水平。