[发明专利]一种猪口蹄疫3ABC和2C抗体化学发光检测试剂盒

摘要

一种猪口蹄疫3ABC和2C抗体化学发光检测试剂盒，属免疫学检测领域，所述试剂盒包含化学发光免疫反应板、酶标抗体、血清稀释液、化学发光底物、化学发光增强剂和PBST洗涤液，其特征在于：所述化学发光免疫反应板为乳白色不透明聚苯乙烯96孔板，每孔内底部联合包被3ABC和2C融合蛋白；所述酶标抗体为HRP‑兔抗猪lgG抗体；所述血清稀释液包含Tween‑20、牛血清白蛋白和大肠杆菌裂解液；所述化学发光底物为鲁米诺和牛血清白蛋白；所述化学发光增强剂含有IPP、H₂O₂和Tween‑20。本发明所述试剂盒，相对于只包被3ABC抗体的CLIA和市售常用的ELISA试剂盒相比，具有较高的敏感性、特异性和诊断能力，重复性与稳定性也较好。

主权项

1.一种猪口蹄疫3ABC和2C抗体化学发光检测试剂盒，所述检测试剂盒包含化学发光免疫反应板、酶标抗体、血清稀释液、化学发光底物、化学发光增强剂和PBST洗涤液，其特征在于：所述化学发光免疫反应板为乳白色不透明聚苯乙烯96孔板，每孔内底部联合包被3ABC和2C融合蛋白；所述3ABC和2C融合蛋白的联合包被过程为：将3ABC和2C融合蛋白加入到pH=9.6的碳酸盐缓冲液中，使3ABC和2C融合蛋白的浓度均为250ng/mL，30‑37℃水浴15min；再加入柠檬酸铵，溶解，形成包被液，其中，包被液中柠檬酸铵的质量体积分数为20%；以100µL/孔的加样量将包被液加入到化学发光免疫反应板中，37℃孵育1h，再于4℃处理20‑24h，甩掉化学发光免疫反应板中的包被液；再向每孔中加入200µL血清稀释液进行封闭，4℃静置20‑24h；用PBST洗涤液洗涤2‑3次，于37‑50℃干燥1‑2h，装袋封口，2‑8℃保存；所述3ABC融合蛋白为重组蛋白，其中的3C蛋白上第46位组氨酸突变为酪氨酸和第163位半胱氨酸突变为甘氨酸；所述3ABC和2C融合蛋白制备中，3ABC融合蛋白所用的表达载体为pPROEX‑HTb载体，2C融合蛋白所用的表达载体为SUMO载体；所述酶标抗体为辣根过氧化物酶标记的兔抗猪lgG抗体；所述血清稀释液为pH=7.2~7.4且浓度为10mmol/L的磷酸盐缓冲液，其中包含体积分数为 0.01% 的Tween‑20、质量体积百分数为1%的牛血清白蛋白和体积分数为1%的大肠杆菌裂解液；所述化学发光底物包含0.1mmol/L 的鲁米诺和质量体积分数为0.1%的牛血清白蛋白，溶剂为0.05mol/L、pH=8.8的Tris缓冲液；所述化学发光增强剂含有0.07mmol/L的IPP、3mmol/L的H2O2和体积分数为0.002%的 Tween‑20，余量为水。