[发明专利]一种牛口蹄疫3ABC抗体化学发光检测试剂盒

摘要

一种牛口蹄疫3ABC抗体化学发光检测试剂盒，属免疫学检测领域，所述检测试剂盒包含96孔化学发光免疫分析板、酶标抗体、血清稀释液、化学发光底物、化学发光增强剂和PBST洗涤液，其中所述96孔化学发光免疫分析板包被3ABC融合蛋白；酶标抗体为辣根过氧化物酶标记兔抗牛lgG抗体；血清稀释液包含0.01% Tween‑20、1%酪蛋白、10%马血清和1%大肠杆菌；所述化学发光底物为鲁米诺溶液；所述化学发光增强剂含有IPP、H₂O₂和Tween‑20。本发明所述试剂盒相对于市售试剂盒产品，敏感性更高，特异性更强，诊断能力亦优于其他产品。

主权项

1.一种牛口蹄疫3ABC抗体化学发光检测试剂盒，所述检测试剂盒包含96孔化学发光免疫分析板、酶标抗体、血清稀释液、化学发光底物、化学发光增强剂和PBST洗涤液，其特征在于：所述96孔化学发光免疫分析板包被3ABC融合蛋白，所述3ABC融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示；所述酶标抗体为辣根过氧化物酶标记的兔抗牛lgG抗体；所述血清稀释液为pH=7.2~7.4且摩尔浓度为10mmol/L的磷酸盐缓冲液，其中包含体积分数为 0.01% 的Tween‑20、质量体积百分数为1%的酪蛋白、体积分数为10%的马血清和体积分数为1%的大肠杆菌裂解液；所述化学发光底物为0.1mmol/L 的鲁米诺溶液；所述化学发光增强剂包含0.07 mmol/L的IPP、3mmol/L的H2O2和体积分数为0.002%的Tween‑20；所述3ABC融合蛋白的制备方法，包括以下步骤：步骤一、利用基因定点突变技术，获取突变后的3ABC基因，使其编码的3ABC蛋白中3C蛋白上的第46位组氨酸突变成酪氨酸和第163位半胱氨酸突变成甘氨酸；所述3ABC基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示；步骤二、将步骤一获取的3ABC基因和载体 PproExHtB 均用限制性内切酶 BamHI与XhoI双酶切后进行连接，将突变后的全长3ABC基因插入线性化的重组表达质粒构建重组表达质粒PproExhTB‑mu3ABC，鉴定阳性后保存备用；步骤三、将步骤二所得阳性重组表达质粒PproExhTB‑mu3ABC转化大肠杆菌Rosetta（DE3），获取重组大肠杆菌，将重组大肠杆菌接种到培养基上，待OD600=0.4‑0.6时，向培养基中加入IPTG，在16℃、220rpm条件下处理20h进行诱导表达，经离心、裂解，溶解包涵体，纯化蛋白，得3ABC融合蛋白。