[发明专利]一种吉富罗非鱼抗无乳链球菌病优良品系的选育方法

摘要

本发明公开了一种吉富罗非鱼抗无乳链球菌病优良品系的选育方法。通过对不同地理种群的吉富罗非鱼进行人工感染无乳链球菌评估各群体的抗病性能，从中筛选出抗病力较强的地理种群组建抗无乳链球菌病选育基础群；以抗无乳链球菌病性能为主选性状，生长速度为辅选性状，采用动物模型最佳线性无偏差估计(BLUP)法开展家系间和家系内选择，按各家系综合育种值的大小及遗传背景进行留种，经过多个世代选育评估，选育出抗无乳链球菌病能力强、生长又快的吉富罗非鱼优良品系。

主权项

一种吉富罗非鱼抗无乳链球菌病优良品系的选育方法，其特征包括以下步骤：(1)不同地理种群的吉富罗非鱼抗无乳链球菌病性能评估对“佳吉”、“百桂”和“青岛”三个地理种群吉富罗非鱼开展人工感染无乳链球菌实验，每个种群随机取体重为60～80g各300尾鱼，每个种群设置3个平行，经过5～7天暂养，然后进行人工腹腔注射感染菌株为HN016的无乳链球菌,菌液的浓度约为1.70×107cfu/mL,注射剂量为0.3mL/尾,注射感染后将实验鱼养殖在水温为30～31℃的大桶中，每隔3h记录一次各桶的发病及死亡鱼数量，根据死亡率及死亡鱼的累计存活时间评估各种群的抗病力最终确定“佳吉”种群抗无乳链球菌病性能显著优于“百桂”和“青岛”种群，因此以“佳吉”品系吉富罗非鱼作为抗无乳链球菌病品系选育的基础群进行选育；(2)吉富罗非鱼抗无乳链球菌病家系的建立确定以“佳吉”吉富罗非鱼作为选育基础群后，首先对亲鱼进行挑选，其标准为：遗传背景清晰、生长速度快、体型较高、体色鲜艳、条纹整齐、生殖孔发育正常，挑选出雌、雄各100尾作为构建家系的亲本，并对它们注入电子标签进行区分，在2m×1.5m×2m规格的网箱中进行家系配对，配对的原则为雌雄1:1，待产苗后将标记好的亲本捞出在网箱中对鱼苗继续培育，待鱼苗生长至60～80g时，运回实验室进行抗无乳链球菌病性能评估，同时在同塘中进行生长性能的测定；(3)吉富罗非鱼家系抗无乳链球菌病性能及生长性能的评估(3.1)抗无乳链球菌病性能评估A菌株的准备用接种环钓取‑80℃保存的HN016无乳链球菌在固态TSA培养基上划线，28℃培养24h，然后用灭菌枪头挑取单菌落用液态TSB培养基扩大培养约12h，然后大剂量注射感染5尾吉富罗非鱼，待其发病后从脑组织中再次分离出HN016菌株，从而实现菌株活力的复壮，再次用液态TSB培养基对复壮后的菌株进行培养12h,然后用无菌生理盐水调整菌液的浓度为1.7×107cfu/mL；B实验鱼的准备每个家系取体重为60～80g 160尾鱼，在水温约30℃的大桶中暂养5～7d，每天早晚各投喂饲料1次，每隔2d换一半桶水，正常充气，试验开始1d前暂停投饵料；C各家系抗病性能的测定对经过暂养的鱼进行人工腹腔注射浓度为1.7×107cfu/mL的HN016无乳链球菌菌株，注射剂量为0.3mL/尾，将感染后的鱼放回大桶中进行饲养，水温保持在30～31℃，每天按时投喂饲料及定期换水，隔3h记录一次各桶的发病及死亡鱼数量，并对其进行体重、体长、体高及体宽等性状进行测定，利用根据死亡率及死亡鱼的累计存活时间评估各种群的抗病力；(3.2)生长性能评估每个家系随机选取雌、雄鱼各30尾，测量记录好每尾鱼的初始体重、体长、体高及体宽等指标，并通过在背鳍上剪鳍条做好标记后，雌、雄鱼分开放入面积相同的两口池塘进行混养90d,然后再次测量各家系鱼的最终体重、体长、体高及体宽等指标，根据体重日增长率及绝对增长率评估各家系的生长性能；(4)吉富罗非鱼各家系综合育种值的排名根据以上步骤(3)中记录的死亡鱼数量、死亡率以及各家系鱼的体重、体长、体高及体宽等指标，利用ASReml软件分别计算出各家系的抗无乳链球菌病的育种值，以及体重、体长、体高及体宽的育种值，然后统计各个家系的综合育种值W(W＝抗无乳链球菌病育种值70％+生长育种值30％)，根据综合育种值的高低排名，及遗传背景信息对家系进行选留，每个世代选留家系15～20个，每个家系留种亲鱼40尾(雌、雄各20尾)；(5)吉富罗非鱼抗无乳链球菌病专门化品系选育根据上一个世代选留的家系，采用家系间杂交方法构建家系继续开展下一个世代的选育，通过5‑6个世代针对性的选育，有望增加抗病性状和生长性状相关基因的富集，从而实现抗病力强生长速度又快的选育目标。