[发明专利]一种基于微流控芯片的人Y-STR基因位点分型方法

摘要

本发明公开了一种基于微流控芯片的人Y‑STR基因位点分型方法，涉及DNA分析领域。该方法包括选择缓冲体系、选择电泳芯片、Y染色体STR位点选择、电泳等步骤。本发明基于芯片电泳技术结合激光诱导荧光检测系统，在12分钟内分离了5个人Y染色体上的STR基因座(DYS459、DYS446、DYS443、DYS460和Y‑GATA‑A10)，并完成真实血液样本的Y‑染色体STR分型测试。芯片电泳对Y‑染色体STR分型所表现出来的高分辨、快速的分离分析能力，使它有希望成为快速、简便、高效分离检测人类染色体STR位点的分析手段之一。

主权项

一种基于微流控芯片的Y染色体STR位点分型方法，其特征在于：包括下列步骤：(1)选择电泳体系：进样缓冲液体系由50mmol/L三羟甲基氨基甲烷、50mmol/L N‑三(羟甲基)甲基‑3‑氨基丙烷磺酸、1mmmol/L乙二胺四乙酸组成1×TTE缓冲液，pH8.0‑9.0；样本分离体系由POP 4或POP 7胶组成；(2)选择电泳芯片：芯片包括样品池、样品废液池、缓冲液池、缓冲液废液池及十字管道；所述十字管道的横臂左右两端分别向垂直方向延伸，并分别与缓冲液废液池及缓冲液池相通，十字管道的纵臂上端与样品池相通，十字管道的纵臂下端与通过U形延伸段后与样品废液池相通；在十字管道的交叉处与缓冲液废液池之间的横臂上设置检测点；(3)芯片表面修饰：首先将芯片置于真空干燥器中抽真空约10分钟；取出芯片，立即向单个池中加入1M NaOH 65℃保持15min，抽干NaOH，加入1M HCl，室温保持15min，抽干后加入0.25％聚N‑羟乙基丙烯酰胺(pHEA)，室温保持1小时，最后以乙腈抽干微通道置于室温备用；(4)Y染色体STR位点选择:基于中国人群中基因多态性(GD>0.6)和等位基因跨度的考虑，我们选择了其中的五个中国人群多态性大，等位基因跨度较小的五个Y染色体基因座作为研究对象；这五个Y染色体基因座位点分别是DYS459、DYS446、DYS443、DYS460和Y‑GATA‑A10；(5)电泳：用1×TTE缓冲液浸洗2分钟；样品废液池、缓冲液池和缓冲液废液池加入缓冲液后，样品池中注入待测样本；样品废液池、缓冲液池和缓冲液废液池加入缓冲液后，样品池中注入待测样本；进样阶段，样品池0V，样品废液池+500‑800V，缓冲液池+0‑200V，缓冲液废液池+300‑800V，进样5‑60秒后切换电压进入分离阶段；分离时，缓冲液废液池+3000‑4000V，缓冲液池0V，样品池和样品废液池均施加+500‑1100V，运行温度为25℃；；得到血清样本中五个Y染色体基因座位点的出峰时间、相对含量数据。