[发明专利]SBA-15固定化血管紧张素转化酶的制备方法

摘要

本发明提供了一种SBA‑15固定化血管紧张素转化酶的制备方法，利用螯合锌离子的介孔分子筛SBA‑15为载体，以血管紧张素转化酶为固定对象，通过吸附与键和作用，得到SBA‑15固定化血管紧张素转化酶。上述方法得到的产品中，ACE在螯合锌离子的介孔分子筛SBA‑15的孔道内部及分子筛外表面同时实现固定化。本发明制备Zn‑SBA‑15固定化ACE采用的固定化过程简单，且产品稳定性好，本发明制备的Zn‑SBA‑15固定化ACE较游离酶具有更好的温度和pH稳定性。

主权项

1.一种SBA‑15固定化血管紧张素转化酶的制备方法，其特征在于，利用螯合锌离子的介孔分子筛SBA‑15为载体，以血管紧张素转化酶为固定对象，通过吸附与键和作用，得到SBA‑15固定化血管紧张素转化酶；具体步骤为：S1、取孔径为6～7nm的介孔分子筛SBA‑15通过直接或间接吸附螯合的方式制得螯合Zn2+的介孔分子筛SBA‑15；所述直接螯合的具体操作为：将介孔分子筛SBA‑15与浓度为0.05～0.06mol/L的ZnSO4水溶液按质量体积比1:10～20(g/mL)的比例混合，30～40℃水浴震荡45～65min，获得直接螯合Zn2+的SBA‑15载体；所述间接螯合的具体操作为：将介孔分子筛SBA‑15加入到无水乙醇中，向所述无水乙醇中加入3‑(异丁烯酰氧)丙基三甲氧基硅烷，20～30℃水浴震荡10～20h，反应结束后抽滤，收集固体物质，洗净；所述介孔分子筛SBA‑15与无水乙醇、3‑(异丁烯酰氧)丙基三甲氧基硅烷的质量体积比为1:350～400:20～30(g/mL/mL)；将所得固体物质与浓度为0.6～0.8mol/L的亚氨基二乙酸溶液按质量体积比1:10～20(g/mL)的比例混合，30～40℃水浴震荡反应60～90min，反应结束后抽滤，再次收集固体物质；将再次收集的固体物质与浓度为0.05～0.06mol/L的ZnSO4溶液按质量体积比1:10～20(g/mL)的比例混合，30～40℃水浴震荡60～90min，获得间接螯合Zn2+的SBA‑15载体；S2、固定血管紧张素转化酶：将步骤S1制得的螯合Zn2+的介孔分子筛SBA‑15与血管紧张素转化酶溶液按质量体积比1:5～20(g/mL)的比例混合，45℃～50℃，在水浴锅中水浴震荡30～40min，至反应液中的蛋白含量不变，反应结束；抽滤、清洗、除去未吸附结合的血管紧张素转化酶，得到SBA‑15固定化血管紧张素转化酶；所述血管紧张素转化酶溶液以pH为7.8～9.3的硼酸盐缓冲溶液配置，浓度为10～50mg/mL，酶活为0.1～0.2U/mL。