[发明专利]用于鉴定人参是否经过硫磺熏蒸的含硫化合物及其制备方法与应用

摘要

本发明公开了一种用于鉴定人参是否经过硫磺熏蒸的含硫化合物及其制备方法,所述的化合物为25‑烯，24‑磺酸人参皂苷Rg1和/或25‑烯，24‑磺酸人参皂苷Re。本发明提供的化合物可作为快速筛查人参硫熏与否的标准化合物，用于鉴定人参是否经过硫磺熏蒸，具有快速、准确、高效、灵敏等特点，对控制人参质量，保证临床疗效具有重要意义。

主权项

1.用于鉴定人参是否经过硫磺熏蒸的含硫化合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：取硫磺熏蒸人参采用体积浓度为70～80％乙醇回流提取1～3次，每次1～2小时，合并得提取液，浓缩，浓缩液采用阴离子交换树脂、D101大孔树脂、70％乙醇沉淀或正丁醇萃取方法纯化，纯化提取物运用高分辨质谱实时追踪含硫化合物，然后采用制备液相和分析液相分离得到化合物为25‑烯，24‑磺酸人参皂苷Rg1和25‑烯，24‑磺酸人参皂苷Re；所述的阴离子交换树脂纯化方法包括：取人参提取浓缩液，上阴离子离子交换柱，然后分别用超纯水、浓度0.1M甲酸溶液洗脱，收集0.1M甲酸洗脱溶液，减压浓缩；所述的D101大孔树脂纯化方法包括：取人参提取浓缩液，离心，取上清液经D101大孔树脂柱，上样后依次用水、体积浓度50％乙醇和95％乙醇洗脱，收集体积浓度50％乙醇洗脱部位，减压浓缩；(1)第一次制备液相分离方法为：取纯化提取物用制备液相分离，具体的制备液相分离条件为：Waters PrepLC_150系统，Waters 2424 ELSD检测器；色谱柱：SunFireTMPrep C18 OBDTM；流动相：水和乙腈，梯度洗脱程序如下：0–40min时，5‑80％体积比的乙腈,40–42min时，80‑100％体积比的乙腈；流速为7mL/min；进样量：400μl。按保留时间收集流出液，收集时间为12:30～16min的流出液，减压浓缩，冷冻干燥得粉末备用；(2)第二次制备液相分离方法为：取第一次制备液相分离所得粉末用甲醇溶解，进行第二次制备液相分离，制备液相分离条件为：Waters PrepLC_150系统，Waters 2424 ELSD检测器；色谱柱：SunFireTMPrep C18OBDTM；流动相：体积比为82:18的0.1％甲酸和乙腈，流速为7mL/min；进样量：200μl，收集1、2、3、4、5、6和7号色谱峰，收集后用NaOH调pH至中性，并将7号峰收集液减压浓缩并冷冻干燥，备用；(3)分析液相分离方法为：应用UPLC‑Q/TOF‑MS对步骤(2)的峰7成分进一步色谱分离，以指导后续HPLC分离，色谱条件为：Waters ACQUITY UPLCTM系统，色谱柱Waters Acquity HSS T3；梯度洗脱，A相为乙腈，B相为0.1％甲酸溶液，洗脱程序：0‑1min时2％A,1～2min时2～5％A,2–5min时5～12％A，5–10min时12～20％A，流速0.4mL/min；然后应用ACQUITY UPLC Columns Calculator软件，进行UPLC‑HPLC色谱条件的转化，取步骤(2)7号峰干燥物，用HPLC分离的色谱条件为：Waters 2695系统，Alltech 2000 ELSD检测器，色谱柱Waters XSelsct HSS T3；流动相A：乙腈；B：0.1％甲酸溶液，梯度洗脱，洗脱程序：0‑3min时2％A,3–5min时2‑5％A,5–11min时5‑12％A，11‑19min时12‑18.4％A，流速1mL/min；收集峰1、2，分别得到化合物为25‑烯，24‑磺酸人参皂苷Rg1和25‑烯，24‑磺酸人参皂苷Re；所述的化合物25‑烯，24‑磺酸人参皂苷Rg1的结构式为：25‑烯，24‑磺酸人参皂苷Re的结构式为：