[发明专利]一种适用于牛BVDV、IBRV、PIV3、BRSV灭活疫苗的灭活检验方法

摘要

本发明公开了一种适用于牛BVDV、IBRV、PIV3、BRSV灭活疫苗的灭活检验方法。本发明涉及生物医药领域，具体涉及一种针对牛病毒性腹泻病毒、牛传染性鼻气管炎病毒、牛副流感病毒、牛呼吸道合胞体病毒灭活疫苗的灭活检验方法，包括以下步骤：1）灭活后的病毒液在适宜细胞上吸附40‑60min，期间振摇2‑3次；2）吸附后，在细胞转瓶中加入一定体积的细胞维持液继续培养，观察细胞病变，对于无细胞病变的病毒液，收获细胞培养液，并冻融2‑3次；3）取冻融后的细胞培养液10‑15ml，接种于适宜细胞上吸附，继续培养。进行观察和荧光检测，如没有特异性荧光，则表明灭活完全。本发明中公开的技术方案保证了抗原浓度和病毒感染时间。经本发明灭活检验方法检验病毒的检出率高，可以有效确保灭活疫苗的生物安全。

主权项

一种适用于牛BVDV、IBRV、PI3、BRSV灭活疫苗的灭活检验方法，其特征是，包括以下步骤：1）选择适宜牛病毒性腹泻病毒及牛传染性鼻气管炎病毒、牛副流感3型病毒或牛呼吸道合胞体病毒在适宜生长的细胞系进行复苏培养；2）选用2个已长成良好细胞单层，密度达80%‑90% 的适宜体积的转瓶，弃去细胞培养液，取灭活后的病毒液20‑30ml接种于细胞转瓶中，置37℃、含5%CO₂培养箱中，使灭活后的病毒液在前述适宜细胞上吸附40‑60min，期间振摇2‑3次；3）吸附后，在细胞转瓶中加入一定体积的细胞维持液，将细胞转瓶置于37℃的CO₂培养箱中继续培养3‑4日后，观察细胞病变，对于无细胞病变的病毒液，收获细胞培养液，并冻融2‑3次；4）取冻融后的细胞培养液10‑15ml，接种于175cm²方瓶已生长至密度为80%‑90% 的适宜细胞上吸附40‑60min后，在细胞转瓶中加入营养维持液，将细胞瓶置于37℃的CO₂培养箱中继续培养3天，对于可出现细胞病变的病毒液，观察细胞病变，如无细胞病变，则表明灭活完全；5）对于正常不出现细胞病变的病毒液，收获培养液，进一步进行荧光染色，如没有特异性荧光，则表明灭活完全；如出现特异性荧光，则灭活不完全。