[发明专利]一种测定玛卡中腺嘌呤含量的新方法

摘要

本发明涉及循环伏安分析与化学修饰电极领域，具体涉及一种测定玛卡中腺嘌呤含量的电极制作和电化学分析方法。该方法依次用邻苯二胺、β‑环糊精、银‑碳纳米管修饰玻碳电极、制备出了可用于测定玛卡中腺嘌呤含量的电化学传感器。该发明的关键特征是将碳纳米管加入到AgNO₃溶液中，然后将修饰过的玻碳电极放入其中并在电化学条件下扫描。结果表明，该修饰电极对腺嘌呤的电催化效果明显。该方法灵敏、简便、重现性好，应用此方法能够准确的测定玛卡中腺嘌呤的含量。与测定腺嘌呤的传统方法相比较，本发明操作简单，测试成本低并且易于操作。该方法也可应用于其他腺嘌呤药物有效成分含量的测定。

主权项

1.一种测定玛卡中腺嘌呤含量的新方法，其特征在于，包括以下步骤：一、复杂样品环境下腺嘌呤选择性测定电极的制作(1)修饰电极预处理①用砂纸将新玻碳电极(GCE)表面磨平，然后用Al₂O₃抛光粉抛光电极表面，直至电极表面显像出镜面；②在蒸馏水中超声清洗GCE后，取出用水洗净，在电解池中加入0.5mol/L H₂SO₄溶液，连接三电极系统，接通电极连线，设置扫描参数：起始电位‑0.2mV，终止电位0.6V，扫描速度为100mV/s，取样间隔2mV，量程100mA，进行循环扫描极化处理，电脑同时记录I‑E曲线，至循环伏安(CV)曲线稳定为止；(2)修饰电极制备①将电解池中溶液更换为5mmol/L铁氰化钾溶液，将步骤(1)②处理后的GCE置于5mmol/L铁氰化钾溶液中，按照步骤(1)②设置的扫描参数用循环伏安法(CV)扫描至稳定，将该电极取出用水冲洗干净后，在红外灯下干燥；②以步骤(2)①处理过的电极为基本电极，依次在1.00mol/L邻苯二胺溶液、5mmol/Lβ‑环糊精溶液中静置，分别按照步骤(1)②设置的扫描参数用循环伏安法(CV)扫描至稳定，将该电极取出用水冲洗干净后，在红外灯下干燥；③采用HNO₃与HCl体积比3:1、回流10～12h的方法将碳纳米管(MWNTs)羧基化，用0.01mol/L NaOH溶液将溶液pH调整至中性，离心干燥；④取步骤(2)③中处理好的的MWNTs于N，N‑二甲基甲酰胺(DMF)中超声分散20～40min，MWNTs与DMF的添加比例为1mg MWNTs加入1～2mL DMF，然后加入0.1～0.5mg/mL AgNO₃溶液中混合，得到稳定的黑色分散液；⑤将电解池中溶液更换为步骤(2)④获得的黑色分散液，将步骤(2)②修饰后的GCE放入上述黑色分散液中，超声5～10min，按照步骤(1)②设置的扫描参数用循环伏安法(CV)扫描至稳定，取出电极，红外灯下烘干即得o‑PD/β‑CD/Ag‑MWNTs/GCE，放在PBS缓冲溶液中保存，备用；二、标准曲线的建立‑总碱基标准品的测定分别配制0mg/ml、0.2mg/ml、0.4mg/ml、0.6mg/ml、0.8mg/ml和1mg/ml的腺嘌呤标准溶液，依次加入电解池中，使用步骤一中修饰好的电极o‑PD/β‑CD/Ag‑MWNTs/GCE，按照步骤(1)②设置的扫描参数分别对腺嘌呤标准溶液进行循环伏安法(CV)扫描至稳定，记录峰高，绘制腺嘌呤标准曲线并得到线性方程；三、玛卡中腺嘌呤含量测定①取玛卡样品，粉碎后过筛，得到玛卡粉末；②取玛卡粉末，用丙酮在90℃条件下索氏提取，玛卡粉末与丙酮的质量比为1:25～35，得到提取液后，经旋转蒸发仪浓缩，过0.45um微孔滤膜，用PBS缓冲溶液将浓缩液稀释5倍，冷藏备用；③取步骤三②配制好的玛卡样品溶液于电解池中，使用步骤一得到的修饰电极o‑PD/β‑CD/Ag‑MWNTs/GCE，按照步骤(1)②设置的扫描参数用循环伏安法(CV)扫描，得到峰电流数值，然后根据标准曲线获取玛卡中腺嘌呤的浓度指数，通过线性方程得到玛卡中腺嘌呤含量的测定结果。