[发明专利]一种增加植物来源糖基转移酶基因可溶性异源表达的方法

摘要

本发明公开了一种增加植物来源糖基转移酶基因可溶性异源表达的方法，将标签蛋白基因与目标蛋白基因构建到表达载体上，导入到大肠杆菌中构建得到重组菌，重组菌诱导表达，标签蛋白与目标蛋白进行融合表达，从而提高糖基转移酶在大肠杆菌中的可溶性表达；所述标签蛋白基因为3’‑磷酸腺苷‑5’磷酸酶基因、2‑氧代‑3‑脱氧‑6磷酸葡萄糖酸醛缩酶基因或者抗终止作用因子基因中的至少一种，将标签蛋白基因构建在表达载体的Nde I和Hind III之间，将目标蛋白构建在Hind III和EcoR I之间，且标签蛋白和目标蛋白的之间添加一组肠激酶酶切位点，蛋白序列为DDDDK。融合表达与之前目标蛋白单独表达相比，蛋白的可溶性增加一倍，且酶活提高了80%。

主权项

1.一种增加植物来源糖基转移酶基因可溶性异源表达的方法，其特征在于，将标签蛋白基因与目标蛋白基因构建到表达载体上，导入到大肠杆菌中构建得到重组菌，重组菌诱导表达，标签蛋白与目标蛋白进行融合表达，提高糖基转移酶在大肠杆菌中的可溶性表达；所述标签蛋白基因为3’‑磷酸腺苷‑5’磷酸酶基因、2‑氧代‑3‑脱氧‑6磷酸葡萄糖酸醛缩酶基因或者抗终止作用因子基因中的一种，所述目标蛋白基因为植物来源糖基转移酶基因；将标签蛋白基因构建在表达载体的Nde I和Hind III之间，将目标蛋白构建在Hind III和EcoR I之间，且标签蛋白和目标蛋白的之间添加一组肠激酶酶切位点，蛋白序列为DDDDK；所述目标蛋白基因为甜叶菊来源的糖基转移酶基因，为GenBank accession no: AAR06912，基因序列见SEQ.No.1所示；所述3’‑磷酸腺苷‑5’磷酸酶基因为GenBank accession no: BAE78215，基因序列见SEQ.No.2所示；2‑氧代‑3‑脱氧‑6磷酸葡萄糖酸醛缩酶基因为GenBank accession no:YP_006120211，基因序列见SEQ.No.3所示；抗终止作用因子基因为GenBank accession no: AAC76203，基因序列见SEQ.No.4所示。