[发明专利]一种基于16SrDNA测序的榨菜专用直投式发酵剂定向制备方法

摘要

本发明涉及蔬菜加工与食品生物技术领域，具体涉及一种基于16S rDNA测序的榨菜专用直投式发酵剂定向制备方法，包括于榨菜盐渍池中取样；提取样品DNA并做琼脂糖凝胶电泳检测后做PCR，扩增16S rDNA；获得的PCR产物进行高通量测序并做比对分析，确定优势菌群种类与组成比例；优势菌株的定向筛选；定向筛选菌株的高密度增殖培养；经高密度增值培养的菌液经离心并冷冻干燥得到各定向筛选和高密度增值培养的菌株冷冻干燥粉，按照16S rDNA测序确定的优势菌群种类与组成比例混合，制得榨菜专用直投式发酵剂。本发明可有效解决传统直投发酵剂存在发酵制品风味单一、发酵风味不醇厚等问题，具有产物稳定、亚硝酸盐含量低的特点。

主权项

一种基于16S rDNA测序的榨菜专用直投式发酵剂定向制备方法，其特征在于至少包括以下步骤：(1)于榨菜盐渍池中取样，样品置于无菌冷冻管中，立即放入液氮中保存，然后置于超低温冰箱中，(2)提取样品DNA并做琼脂糖凝胶电泳检测后做PCR，扩增16S rDNA，所述的PCR扩增的特异性引物的上游引物515F具有如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列，特异性引物的下游引物907R具有如SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列，PCR扩增区域为微生物16S rDNA的V4‑V5可变区域，测序前需对所述PCR产物进行回收纯化，(3)将步骤(2)获得的PCR产物进行高通量测序并做比对分析，确定优势菌群种类与组成比例，(4)优势菌株的定向筛选，(5)定向筛选菌株的高密度增殖培养，(6)离心并冷冻干燥，将步骤(5)经高密度增值培养的菌液加入脱脂奶粉，摇匀后离心，去除上清培养液，收集试管底部菌体；收集的菌体加入冻干保护剂后做冷冻干燥，其中：菌体与冻干保护剂质量分数配比为1:3‑1:2.5，(7)将步骤(6)得到的各定向筛选和高密度增值培养的菌株冷冻干燥粉按照16S rDNA测序确定的优势菌群种类与组成比例混合，制得榨菜专用直投式发酵剂。