[发明专利]一种检测力竭运动小鼠心肌连接蛋白43含量的方法

摘要

本发明属于化学发光传感器技术领域，首先利用抗体修饰钴纳米粒子，并利用戊二醛法将抗体修饰在氨基化磁珠表面。检测时，将含有心肌连接蛋白43的样品加入到抗体修饰的磁珠溶液中，然后加入抗体修饰钴纳米粒子，形成三明治夹心结构，随后进行分离，然后根据钴纳米粒子催化鲁米诺产生化学发光，根据化学发光强弱实现对心肌连接蛋白43含量的测定；并对力竭运动后小鼠心肌中心肌连接蛋白43含量进行测定，方法具有简单，成本低，灵敏度高的特点。

主权项

1.一种检测力竭运动小鼠心肌连接蛋白43含量的方法，其特征在于利用抗体修饰钴纳米粒子，并利用戊二醛法将抗体修饰在氨基化磁珠表面；检测时，将含有心肌连接蛋白43的样品加入到抗体修饰的磁珠溶液中，然后加入抗体修饰钴纳米粒子，形成三明治夹心结构，随后进行分离，然后根据钴纳米粒子催化鲁米诺产生化学发光，根据化学发光强弱实现对心肌连接蛋白43含量的测定；并对力竭运动后小鼠心肌中心肌连接蛋白43含量进行测定；测定步骤如下：(1)钴纳米粒子的制备首先，将制备钴纳米粒子实验所用的玻璃仪器用王水泡洗2h，烘干备用；然后在10mL浓度为1％的氯化钴CoCl2·6(H2O)中加入1.0mL浓度为10％的氢氧化钠，50℃条件下，搅拌反应30分钟，室温下冷却，得钴纳米粒子溶液，4℃条件下保存备用；(2)抗体修饰钴纳米粒子的制备首先，将上述所得的500μL钴纳米粒子溶液与2mL pH 7.4的磷酸缓冲溶液混合，并加入1mM的巯基乙胺100μL，37℃条件下反应过夜，然后加入200μL含5％戊二醛的pH 7.0的0.1M磷酸缓冲溶液，在37℃下反应2小时后，用磷酸缓冲溶液离心清洗3次，再分散在磷酸缓冲溶液中，随后加入0.5mL心肌连接蛋白43抗体溶液，37℃条件下，震荡反应24h，得抗体/钴纳米粒子复合物，离心清洗后，再次分散在磷酸缓冲溶液中，4℃下保存；(3)抗体修饰磁珠的制备将1.0mL的氨基化磁珠溶液用2.0mL的pH 7.0的0.1M磷酸缓冲溶液洗涤3次，然后将其加入到200μL 5％戊二醛的pH 7.0 0.1M磷酸缓冲溶液中，在37℃下反应2小时后，用磷酸缓冲溶液离心清洗3次，再分散在磷酸缓冲溶液中，随后加入抗体2μg，4℃振动孵育12h，得抗体修饰磁珠；将所得复合物离心清洗后，再次分散在磷酸缓冲溶液中，4℃下保存；(4)心肌连接蛋白43的检测取20μL含心肌连接蛋白43的样品溶液加入到将50μL抗体修饰磁珠溶液中，37℃条件下，反应30min，然后再加入50μL抗体修饰钴纳米粒子，37℃条件下，反应2h，磁性分离清洗后，将磁性产物分散在磷酸缓冲溶液中，得磁性产物分散液，利用化学发光仪器进行化学发光测定；(5)化学发光测定取200μL鲁米诺溶液置于微反应器中，加入20μL过氧化氢，然后注入上述(4)所得的磁性产物分散液20μL，记录化学发光信号，根据化学发光信号的强度实现对心肌连接蛋白43含量的测定。