[发明专利]一种运用高效液相色谱法测定氨糖含量的方法

摘要

本发明公开了一种运用高效液相色谱法测定氨糖含量的方法，其包括以下步骤：步骤一，对照品溶液的配制；步骤二，样品处理；步骤三，确定液相色谱条件等。本发明可以快速准确测定氨糖含量，减少实验室环境对方法的影响，降低实验室检测成本，提高检测准确度、重现性，本发明对环境要求不高，样品溶液也比较稳定，存在检测精度高，重复性好的优点；同时，该发明减少了溶剂使用量，分析成本大大降低，提供了一种简便、快捷、准确且低成本测定氨糖含量的高效液相色谱分析方法，检测产品可以是原料、纯氨糖片、氨糖MSM片、氨糖软骨素片等产品，适用范围广，实用性强。

主权项

1.一种运用高效液相色谱法测定氨糖含量的方法，其特征在于，其包括以下步骤：步骤一，对照品溶液的配制；步骤二，样品处理；步骤三，确定液相色谱条件；所述，步骤一包括以下步骤：采用USP 标准品作为氨糖对照品，精密称定适量的D‑氨基葡萄糖盐酸盐对 照品置一容量瓶中，加入醋酸钠溶液，超声溶解；用醋酸钠溶液稀释至刻度，混匀作为标准储备液；吸取适量标准储备液至另 一容量瓶中，加异硫氰酸苯酯，再加甲醇，超声溶解，加甲醇/水至刻度，混匀，水浴中加热， 冷却至室温；转移上述溶液适量至离心管中，加入庚烷，振摇，将甲醇层转移至HPLC瓶中， 进样；所述，步骤二包括以下步骤：精密称取一定量的供试品置一容量瓶中，加入适量醋酸钠溶液，超声溶解；用醋酸钠溶液稀释至刻度，混匀；吸取适量上述溶液至另一容量瓶中，加异硫氰酸苯酯，再加甲醇，超声溶 解，加甲醇/水至刻度，混匀，水浴中加热，冷却至室温；转移上述溶液适量至离心管中，加入庚烷，振摇，将甲醇层转移至HPLC瓶 中，进样；所述，步骤三包括以下步骤：选择高效液相色谱仪和带紫外检测器；选择产品参数为C18，50mm×4.6mm，2.7μm的色谱柱；设定流速为 1.0mL/min；设定第一流动相为磷酸溶液；第二流动相为乙腈；梯度如下表所示：设定检测波长为UV240nm；设定柱温为25℃；设定进样量为2μL；氨糖的含量的计算公式如下式所示：其中：A对、A样分别为对照品、样品的峰面积；W对为对照品的重量，mg；W样为样品的重量，g；C对为对照品的含量；氨基葡萄糖盐酸盐含量单位为mg/ g；氨基葡萄糖硫酸钾盐含量单位为mg/ g；氨基葡萄糖含量单位为mg/ g；标准储备液的配制为：精密称定适量的D‑氨基葡萄糖盐酸盐对照品置一容量瓶中，加入0.1mol/L醋酸钠溶液，超声溶解，用0.1mol/L醋酸钠溶液稀释至刻度，混匀作 为标准储备液，其浓度为1.0mg/ml；所述步骤一中的溶液的配制为：吸取标准储备液适量至另一容量瓶中，加350μl异硫氰酸苯 酯，再加10ml甲醇，超声溶解，加甲醇/水至刻度，混匀，80℃水浴中加热10min，冷却至室温； 转移上述溶液5ml溶液至离心管中，加入5ml庚烷，振摇2min，将甲醇层转移至HPLC瓶中，进 样；所述步骤二中的样品处理为：称取一定量的供试品置一容量瓶中，加入0.1mol/L醋酸钠溶液， 超声溶解；用0.1mol/L醋酸钠溶液稀释至刻度，混匀；吸取上述溶液至另一容量瓶中，加350 μl异硫氰酸苯酯，再加10ml甲醇，超声溶解，加甲醇/水至刻度，混匀，80℃水浴中加热 10min，冷却至室温；转移上述溶液5ml溶液至离心管中，加入5ml庚烷，振摇2min，将甲醇层 转移至HPLC瓶中，进样。