[发明专利]一种食品中金黄色葡萄球菌苯酚可溶性调控蛋白的检测方法

摘要

本发明公开了一种食品中金黄色葡萄球菌苯酚可溶性调控蛋白的检测方法，其步骤包括1）根据目标物的分子量找出对应的色谱峰，并结合Mascot在线搜索，明确目标物的氨基酸序列。优化质谱条件建立各个苯酚可溶性调控蛋白的定量分析方法；2）建立不同基质的样品的预处理技术，并用高效液相色谱串联质谱检测样品中目标物含量；3）将合成的高纯度多肽作为标准样品用作定量分析；4）建立不同基质的样品中金黄色葡萄球菌苯酚可溶性调控蛋白随着生长时间的浓度变化曲线。该食品中金黄色葡萄球菌苯酚可溶性调控蛋白的检测方法具有前处理过程简单、检验快速、结果准确、选择性好和灵敏度高的特点。

主权项

一种食品中金黄色葡萄球菌苯酚可溶性调控蛋白的检测方法，其特征在于：将金黄色葡萄球菌加入食品或培养基中，过夜生长，用正丁醇提取，转移正丁醇层，常温下氮气吹干，用超纯水复溶，0.22µm微孔滤膜过滤，以甲酸溶液‑乙腈体系为流动相，经液相色谱柱分离后，用质谱仪得到的离子信息和图谱，结合Mascot在线搜索进行定性分析，用液质进行定量分析，所述质谱仪为四极杆串联飞行时间质谱，所述食品为肉、奶制品、果汁和蔬菜，所述色谱条件如下：色谱柱：Zorbax300ÅSB‑C8：3.5 µm,2.1×150 mm,Agilent；流动相：A：0.1%甲酸水溶液；B：乙腈；梯度程序：0‑2.5min，10%B;2.5‑5min,50%B;5‑20min,50%B‑90%B；进样量：5µL；柱温：30℃，所述质谱条件如下：离子化模式：DualAJSESI；质量扫描范围：100‑3200m/z；毛细管出口电压：175V；干燥器温度：325℃，干燥器流速：10L/min；鞘气温度：350℃，流速：7.5L/min；毛细管电压：4000V；碰撞电压：PSMα1:60V，PSMα2:55V，PSMα3:65V，PSMα4:65V，δ‑toxin:65V。