[发明专利]一种分离纯化纳豆芽孢杆菌中维生素K2的方法

摘要

本发明公开了一种分离纯化纳豆芽孢杆菌中维生素K₂的方法，包括以下步骤：维生素K₂萃取液的获取，维生素K₂上柱原液的获取，低纯度的维生素K₂浓缩液的获取，较高纯度的维生素K₂浓缩液的获取，高纯度的维生素K₂的获取，维生素K₂晶体的获取。本发明的优点在于：(1)获得的维生素K₂晶体产品纯度高、生物活性高、回收率高；(2)分离纯化工艺操作简单、条件温和、处理能力大；(3)各有机溶剂可回收利用，便于工业化应用。

主权项

1.一种分离纯化纳豆芽孢杆菌中维生素K₂的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)维生素K₂萃取液的获取以纳豆芽孢杆菌发酵液为维生素K₂提取原液，离心获取菌体，烘干后，采用第一有机溶剂进行萃取以获取维生素K₂萃取液；(2)维生素K₂上柱原液的获取将维生素K₂萃取液通过膜分离设备除去不溶性杂质，将获得的维生素K₂滤液蒸干，然后以极性有机溶剂重溶，获取维生素K₂上柱原液；(3)低纯度的维生素K₂浓缩液的获取将维生素K₂上柱原液通过大孔吸附树脂柱吸附，采用湿法或干法上柱，然后以第二有机溶剂清洗，最后用第三有机溶剂进行洗脱，收集相应洗脱液并对其进行浓缩，从而获取低纯度的维生素K₂浓缩液；(4)较高纯度的维生素K₂浓缩液的获取将低纯度的维生素K₂浓缩液经过分子量排阻层析柱纯化，然后以第四有机溶剂进行洗脱，收集相应洗脱液并对其进行浓缩，从而获取较高纯度的维生素K₂浓缩液；(5)高纯度的维生素K₂的获取将较高纯度的维生素K₂浓缩液溶解于第五有机溶剂后，通过反相硅胶柱分离，然后用第六有机溶剂洗脱并分段收集，即可获得高纯度的维生素K₂；(6)维生素K₂晶体的获取以第七有机溶剂将维生素K₂高温溶解，低温结晶，并重结晶，即可获得维生素K₂晶体；所述用于萃取的第一有机溶剂为乙醇、正丁醇、乙酸、二氯甲烷、异戊醇、正己烷、乙酸乙酯、三氯甲烷、四氯化碳、丙酮、乙醚、甲苯中的一种或多种的混合液。