[发明专利]一种基于分子印迹技术的壳四糖单体分离提取方法

摘要

本发明公开了一种基于分子印迹技术的壳四糖单体分离提取方法，该分离提取方法步骤如下：布袋式过滤‑纳滤膜过滤‑壳四糖分子印迹树脂吸附‑壳四糖分子印迹树脂洗脱‑脱除锌离子‑冷冻干燥。本发明的基于分子印迹技术的壳四糖单体分离提取方法与现有技术相比，具有分离工艺步骤简单、生产成本低、壳四糖单体纯度高、可实现规模化制备等特点。

主权项

1.一种基于分子印迹技术的壳四糖单体分离提取方法，其特征在于，该分离提取方法步骤如下：1）布袋式过滤：将壳聚糖酶解液用布袋式过滤机进行过滤，并静置澄清20min，除去壳聚糖酶解液中的颗粒杂质和不溶物；2）纳滤膜过滤：将布袋式过滤机过滤后的液体用纳滤膜G5进行过滤，获得平均分子量小于1000DA的壳寡糖混合组分透过液；3）壳四糖分子印迹树脂吸附：将壳寡糖混合组分透过液流过装有壳四糖分子印迹树脂的树脂柱，利用壳四糖分子印迹树脂选择性吸附透过液中的壳四糖，实现壳四糖单体与其它壳寡糖组分的分离；4）壳四糖分子印迹树脂洗脱：壳四糖分子印迹树脂吸附饱和后，用洗脱剂进行洗脱；5）脱除锌离子：将洗脱液用活性炭G‑60处理后过滤，使得壳四糖和锌离子分离，壳四糖被活性炭吸附；收集活性炭，然后用乙醇与去离子水的混合液将壳四糖洗脱下来，并用盐酸溶液调节溶液pH值至2‑4；6）冷冻干燥：收集壳四糖洗脱液，经真空浓缩冻干后，得到壳四糖单体产品；所述的壳四糖分子印迹树脂的合成方法如下：壳四糖分子印迹树脂中各原料的重量配比为：主单体65‑95份；配位单体5‑15份；致孔剂5‑9份；分散剂0.5‑1.5份；引发剂0.05‑0.3份；将配位单体和引发剂按重量份配比溶于无水乙醇中，使得配位单体和引发剂在无水乙醇中的质量百分比浓度为10‑20%，然后将混合液与主单体，致孔剂混合均匀；在强力搅拌下，将此混合体系缓慢加到含有分散剂的三口烧瓶中，通入氮除氧30 min；用恒温水浴加热至72‑78℃，调控搅拌速度，聚合反应6h，然后升温至80‑90℃再继续反应3h；冷至20‑30℃后，将聚合物微球过滤、洗涤得到分子印迹树脂微球；将制备的分子印迹树脂微球装入萃取器中，用无水乙醇萃取处理6h，除去致孔剂、引发剂和未反应的少量残留单体，室温凉干后，用洗脱剂溶液搅拌浸泡处理，洗脱掉印迹模板分子和锌离子，再用去离子水洗至pH值至6‑8，然后用0.01mol/L的锌离子溶液配位平衡后，并在50‑70℃真空干燥，制得壳四糖分子印迹树脂微球；所述的配位单体为N‑[2‑(二甲氨基)乙基]‑N'‑[(2‑羟基‑4‑乙烯基苯基)]草酰胺双核锌‑壳四糖，主单体为乙二醇二甲基丙烯酸酯，致孔剂为石油醚90‑120，引发剂为偶氮二异丁腈，分散剂为聚乙烯醇；所述的洗脱剂为0.1 mol/L的盐酸溶液。