[发明专利]抗伪狂犬病毒猪源化单抗制备方法及其应用在审
| 申请号： | 201611180957.4 | 申请日： | 2016-12-20 |
| 公开（公告）号： | CN108203716A | 公开（公告）日： | 2018-06-26 |
| 发明（设计）人： | 包晟;谢亦武;曹天福;包世啟 | 申请（专利权）人： | 深圳市雅臣爱己生物工程有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N15/13;C07K16/46;C07K16/08;A61K39/42;A61P31/22;A23K50/30;A23K20/147 |
| 代理公司： | 深圳市顺天达专利商标代理有限公司 44217 | 代理人： | 郭伟刚 |
| 地址： | 518000 广东省深圳市龙*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明涉及基因工程重组抗猪伪狂犬病毒猪源化单抗制备及其应用，具体涉及抗伪狂犬病毒猪源化单抗制备方法及其应用；本发明筛选各种能稳定分泌抗伪狂犬病毒(PRV)糖蛋白单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞，分泌单克隆抗体，扩大培养后富集、纯化、测序，设计相应的特异性引物，将其猪源化，以病毒类基因载体或非病毒基因载体(包括质粒DNA、微环DNA等)进行克隆，将不同的猪源化单抗采用昆虫细胞或CHO细胞发酵大规模生产猪源化单抗蛋白，或者直接将上述含猪源化单抗基因载体输入猪只。通过给猪注射或饲喂猪以及滴鼻和喷雾等方式，采用这种抗伪狂犬病毒猪源化单抗中和伪狂犬病毒，以被动免疫方式净化伪狂犬病阳性猪场以及预防和治疗猪伪狂犬病。 | ||
| 搜索关键词： | 猪源 单抗 伪狂犬病毒 制备 基因载体 非病毒基因载体 分泌单克隆抗体 阳性杂交瘤细胞 应用 基因工程重组 猪伪狂犬病毒 单克隆抗体 特异性引物 猪伪狂犬病 被动免疫 昆虫细胞 扩大培养 伪狂犬病 质粒DNA 糖蛋白 测序 滴鼻 分泌 富集 喷雾 饲喂 微环 发酵 蛋白 克隆 中和 注射 病毒 筛选 净化 治疗 预防 | ||
【主权项】：
1.抗伪狂犬病毒猪源化单抗制备方法，其特征在于，包括如下步骤：S100、制备杂交瘤细胞：将抗伪狂犬病毒经过小鼠免疫和细胞融合，制得可分泌抗伪狂犬病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞；S200、可变区序列与恒定区序列的克隆：提取所述杂交瘤细胞的总RNA，反转录制备cDNA，分别扩增鼠源抗体可变区的轻链、重链的序列；取淋巴细胞提取其总RNA，反转录制备cDNA，分别扩增猪源抗体恒定区轻链、重链序列；S300、轻链与重链全长基因的克隆：重叠延伸所述鼠源抗体可变区轻链和所述猪源抗体恒定区轻链，获得鼠‑猪嵌合轻链全长基因序列；重叠延伸所述鼠源抗体可变区重链和所述猪源抗体恒定区重链，获得鼠‑猪嵌合重链全长基因序列；S400、制备抗伪狂犬病毒猪源化单抗：将所述鼠‑猪嵌合轻链全长基因序列和所述鼠‑猪嵌合重链全长基因序列克隆于基因载体，扩增后纯化获得基因型抗伪狂犬病毒猪源化单抗；或者，将所述鼠‑猪嵌合轻链全长基因序列和所述鼠‑猪嵌合重链全长基因序列克隆于表达载体并在表达系统中表达，获得蛋白型抗伪狂犬病毒猪源化单抗。
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