[发明专利]一种诱导杨树不定芽染色体加倍的方法

摘要

本发明公开了一种诱导杨树不定芽染色体加倍的方法，包括对外植体进行愈伤组织的分化培养后再对愈伤组织进行秋水仙碱诱导培养。本发明方法根据离体培养叶片愈伤发育状态即时判别诱导分化处理的适宜时机，并对愈伤组织进行秋水仙碱诱导培养，然后进行不定芽再生培养、生根培养，获得杨树四倍体再生植株。本发明方法显著提高杨树四倍体的诱导率，增强施加诱导剂的时效性，同时减少嵌合体的产生，对其他植物四倍体诱导等也具有重要借鉴意义。

主权项

1.一种诱导杨树不定芽染色体加倍的方法，其特征是，包括如下顺序进行的步骤：1）将杨树无菌苗叶片剪切成无菌叶片块；2）将叶片块接种到叶片分化再生培养基中，进行愈伤组织分化培养，形成愈伤组织，在愈伤组织分化培养过程中，采用显微镜或放大镜观察离体外植体切口处愈伤组织的发育状态；3）在显微镜或放大镜观察离体叶片块切口处愈伤组织发育到第Ⅱ阶段，离体叶片切口处形成的愈伤组织宽度>0mm，且≤1mm的阶段时，将进行了愈伤组织分化培养后的离体叶片接种于液体分化再生培养基中，进行愈伤组织的秋水仙碱诱导培养，其中所述液体分化再生培养基为MS基本培养基+NAA 0.05 mg/L+6‑BA 0.4 mg/L+蔗糖30 g/L+秋水仙碱30 ‑40mg/L；4）将秋水仙碱诱导培养2‑4天后，将离体叶片取出并接种于不定芽再生培养基中，不定芽从叶片愈伤中再生；5）将不定芽接种于生根培养基中，进行诱导生根培养，获得杨树再生植株。