[发明专利]一种转Bt基因作物外源蛋白环境持留的生物测定方法

摘要

本发明提供一种转Bt基因作物外源蛋白环境持留的生物测定方法，包括如下步骤：采集收割当天的转Bt基因作物秸秆和土壤样品作为阳性对照，之后每隔10天采集一次秸秆样品和土壤样品作为试验处理；抽提秸秆样品和土壤中的总蛋白；透析法除去总蛋白抽提液中的盐离子；冷冻浓缩总蛋白至干粉状；添加总蛋白干粉至二化螟(Chilo suppressalis)人工饲料；不添加总蛋白干粉的人工饲料作为空白对照；在超净工作台中分装人工饲料入二化螟饲养瓶；每瓶接入孵化24h之内的二化螟幼虫15头，瓶口用扎有孔的保鲜膜和黑布封口；接虫后放入28℃、光照16D:8L的人工气候箱中培养；10天后取出养虫瓶，观察鉴别二化螟的死亡和发育情况，计算外源蛋白在环境中的相对持留量和活性衰减动态。

主权项

1.一种转Bt基因作物外源蛋白环境持留的生物测定方法，其特征在于，包括如下步骤：1）在种植Bt作物的田块采集秸秆样品和土壤样品；2）对秸秆样品和土壤样品进行预处理；3）提取秸秆样品和土壤样品中的总蛋白；4）对总蛋白提取液进行透析纯化和冷冻干燥浓缩；5）将浓缩后的总蛋白加入二化螟人工饲料；6）分装二化螟人工饲料入饲养瓶；7）将孵化24小时之内二化螟幼虫接入饲养瓶；8）培养10天后检查二化螟的死亡与生长发育情况，计算外源蛋白在环境中的相对持留量和活性衰减动态；所述样品的采集方法为：转Bt基因作物收割当日在种植转Bt基因作物的田间采集秸秆样品和10cm深的根围土样品作为阳性对照，之后每隔10天在种植转Bt基因作物的田块采集秸秆样品和10cm深的根围土样品作为试验处理，收割当日的秸秆样品采集量大于5kg、10cm深的根围土采集量大于10kg，之后每次秸秆样品采集量大于500g、10cm深的根围土采集量大于1000g，采集好的样品用大号自封袋装好，贴上标签，‑40℃以下保存；所述浓缩后的总蛋白加入二化螟人工饲料的方法为：配制15份各重200g二化螟人工饲料，当人工饲料冷却至45℃时加入100g秸秆样品总蛋白提取物或200g土壤样品的蛋白提取物，并充分搅拌2min，制成5种类型的人工饲料：①添加收割后第N天的秸秆总蛋白干粉的人工饲料，②添加收割后第N天的土壤总蛋白干粉的人工饲料，③添加收割当日的秸秆总蛋白干粉的人工饲料，④添加收割当日土壤总蛋白干粉的人工饲料，⑤不加任何提取物的人工饲料，每种类型人工饲料各3份，即3次重复。