[发明专利]一种定量检测海参多糖的方法

摘要

本发明公开了一种定量检测海参多糖的方法，包括步骤：向三氟乙酸水溶液中加入硫酸软骨素及岩藻糖，配制标准样品溶液；提取待测海参或海参制品样品中的多糖；酸水解、除酸，加入氨水、内标物乳糖、衍生化；液相色谱‑质谱联用检测含有硫酸软骨素二糖衍生物、岩藻糖衍生物的各浓度标准样品溶液及待测样品溶液，得出待测样品中硫酸软骨素和岩藻糖的含量，进而得到待测样品中岩藻聚糖和岩藻糖基化硫酸软骨素的含量。本发明方法用于快速定量测定海参多糖，更准确，方便，且效率高，能够对不同种类、经过不同加工处理的海参多糖进行准确的定量测定，为不同的海参加工产品的质量控制提供了有效手段。

主权项

1.一种定量检测海参多糖的方法，其特征在于，包括如下步骤：S1、向1.3mol/L的三氟乙酸水溶液中加入硫酸软骨素及岩藻糖，配制一系列浓度梯度的含有硫酸软骨素及岩藻糖的标准样品溶液；所述硫酸软骨素及岩藻糖浓度范围为0.04～0.2mg/ml；S2、提取待测样品中的多糖：将待测样品粉碎、混匀后，准确称量，然后采用酶解后醇沉法提取、冻干，得到待测样品海参多糖提取物，向所述待测样品海参多糖提取物中加入三氟乙酸水溶液，所述三氟乙酸水溶液的浓度为1.3mol/L，得到待测样品海参多糖溶液；所述待测样品为海参或海参制品；S3、分别准确量取1.00ml步骤S1制得的各浓度标准样品溶液及步骤S2制得的待测样品溶液，密封，在105℃下水解3h，放置室温，采用冷冻离心浓缩除去溶剂，收集固相；向所述固相物质中加入0.3～1mL甲醇或水，再采用冷冻离心浓缩除去溶剂，重复三次，达到除酸目的，得到各浓度标准样品溶液及待测样品溶液的固相残余物；S4、向步骤S3制得的各样品溶液的固相残余物中分别加入等量的氨水溶解，再加入乳糖作为内标物，加入1‑苯基‑3‑甲基‑5‑吡唑啉酮进行衍生化，得到含有硫酸软骨素二糖衍生物、岩藻糖衍生物的各浓度标准样品溶液及待测样品溶液；S5、液相色谱‑质谱联用检测步骤S4制得的含有硫酸软骨素二糖衍生物、岩藻糖衍生物的各浓度标准样品溶液及待测样品溶液，得到各样品溶液中硫酸软骨素二糖衍生物和岩藻糖衍生物各自监测离子色谱峰面积；检测条件为：高效液相色谱‑三重四极杆质谱仪；色谱条件为：反相C18色谱柱，柱温30℃，流动相20mmol乙酸铵‑乙腈88:12，V/V，流速0.5mL/min；质谱条件：离子源ESI源，正离子模式检测，喷雾电压5.5kV，辅助加热气温度：600℃，氮气作为碰撞气和喷雾气，选择多重反应监测，监测的离子对包括673.3/175.0、687.3/175.0、495.2/175.0；S6、根据色谱峰保留时间和监测特征离子对区分内标乳糖衍生物、标样的硫酸软骨素二糖衍生物和岩藻糖衍生物，然后以标样色谱峰面积和内标样峰面积的比值作为响应值，根据响应值和标准糖浓度绘制工作曲线，对照工作曲线，得出待测样品中硫酸软骨素和岩藻糖的含量；S7、根据步骤S6得到的硫酸软骨素和岩藻糖的含量，结合公式(1)、(2)得到待测样品中岩藻聚糖和岩藻糖基化硫酸软骨素的含量；X＝m_CS/A％(1)，Y＝m_Fuc×M_(Fuc‑H2O)/M_(Fuc)－X×(1－A％)(2)，其中，X为岩藻糖基化硫酸软骨素的含量mg/g，Y为岩藻聚糖的含量mg/g，m_CS为样品中硫酸软骨素的含量mg/g，m_Fuc为样品中岩藻糖的含量mg/g，A％为硫酸软骨素主链在岩藻糖基化硫酸软骨素所占比例。