[发明专利]一种长果安息香DNA提取方法

摘要

本发明提供一种长果安息香DNA提取方法，该方法在CTAB法基础上加入β‑巯基乙醇、高浓度NaCl、异丙醇和乙醇，β‑巯基乙醇能有效防止酚氧化为醌，避免褐变，防止DNA降解；CTAB为阳离子去污剂，能从低离子强度溶液中沉淀核酸与酸性多聚糖，在高浓度NaCl溶液中，CTAB和蛋白质、多聚糖反应形成复合物，只是不能沉淀DNA；通过异丙醇和乙醇抽提能有效去除蛋白质、多糖和酚类等杂质，且异丙醇能提高DNA沉淀能力，提高DNA的提取量；乙醇能沉淀DNA，洗去残留的高浓度NaCl，纯化DNA。本发明提供的长果安息香DNA提取方法能够有效提取长果安息香中的DNA，提取出的DNA具有很好的完整性和很高的纯度。

主权项

一种长果安息香DNA提取方法，其特征在于，所述DNA提取方法包括：S01：称取长果安息香放入研钵中，向所述研钵中加入液氮，研磨成粉末，将所述粉末放入离心管中；S02：向所述离心管中加入体积比为50:1的2×CTAB缓冲液和β‑巯基乙醇，混合均匀后形成混合液a；S03：将所述混合液a放入65℃水浴中温育40‑60min，温育后的所述混合液a离心，离心得到的上清液a备用；S04：根据体积比为10:1混合所述上清液a和NaCl溶液，搅拌均匀后得到混合液b；S05：根据体积比为1:1混合所述混合液b和溶剂，混匀形成混合液c，所述混合液c离心后留取上清液b，所述溶剂为氯仿与异戊醇的混合溶液；S06：重复步骤S04‑S05，直到无沉淀物，最后一次离心得到的上清液c备用；S07：向所述上清液c中加入异丙醇，轻轻晃动至絮状物出现，离心，离心得到的沉淀物a备用；S08：将所述沉淀物a用浓度为75％的酒精洗涤，离心，离心得到的沉淀物b备用；S09：重复1‑2次步骤S07‑S08，最后一次离心得到的沉淀物c备用；S10：向所述沉淀物c中加入体积比为100:1的灭菌NaCl溶液和RNaseA溶液，混合均匀后置于37℃水浴中消化12‑15h，得到混合液d；S11：根据体积比为1:1混合所述混合液d和冰无水乙醇，慢慢水平转动离心管至产生絮状沉淀，离心，离心得到的沉淀物d备用；S12：将所述沉淀物d放入离心管中，用浓度为75％的酒精洗涤10min，洗涤完毕后将酒精倒出，留取所述沉淀物d；S13：向所述离心管中加入无水乙醇，洗涤，洗涤完毕后将酒精倒出，留取所述沉淀物d；S14：将所述离心管倒置于干燥的灭菌滤纸上，室温干燥至所述沉淀物d透明；S15：向干燥后的所述沉淀物d中加入TE缓冲液进行溶解，溶解后离心，离心得到的上清液d为长果安息香的DNA溶液。