[发明专利]NK细胞体外扩增培养基组合和培养方法

摘要

本公开涉及一种NK细胞体外扩增培养基组合和培养方法，所述培养基组合，包括基础培养基、诱导培养基、增殖培养基和活化适应培养基；所述基础培养基的组成成分包括RPMI‑1640培养基、GT‑T551培养基、庆大霉素和BSA；所述诱导培养基的组成成分包括RPMI‑1640培养基、GT‑T551培养基、BSA、香菇多糖、灵芝多糖、茶多酚、大蒜素和紫杉醇；所述增殖培养基的组成成分包括RPMI‑1640培养基、GT‑T551培养基、BSA、白细胞介素；所述活化适应培养基包括RPMI‑1640培养基、GT‑T551培养基、胰岛素、转铁蛋白和谷氨酰胺。通过上述技术方案，利用本公开所提供的NK细胞体外扩增培养基组合和方法培养获得的NK细胞数量更多，在临床治疗中也具有更高的活性。

主权项

一种NK细胞体外扩增培养方法，其特征在于，包括使用NK细胞体外扩增培养基组合，所述方法包括：基础培养：将分离的单个核细胞接种于基础培养基中培养1‑2天获得基础培养细胞；诱导培养：将所述基础培养细胞接种于诱导培养基中培养2‑4天获得诱导培养细胞；增殖培养：将所述诱导培养细胞接种于增殖培养基中培养4‑7天获得增殖培养细胞；活化适应：将所述增殖培养细胞接种于活化适应培养基中培养0.5‑1.5天；所述基础培养、诱导培养、增殖培养和活化适应在免疫细胞体外扩增装置中进行，所述装置包括细胞培养袋(1)和承载所述细胞培养袋(1)的承载台(3)，该装置还包括容纳于所述细胞培养袋(1)中的磁性浮球(2)以及在悬挂于所述细胞培养袋(1)上方并且能够驱动所述磁性浮球(2)在所述细胞培养袋(1)中移动的磁性悬挂驱动器(4)，所述磁性悬挂驱动器(4)包括能够吸引所述磁性浮球(2)的磁体片(41)和能够悬挂且驱动所述磁体片(41)在所述细胞培养袋(1)上方移动的悬挂驱动架(42)；所述细胞培养袋(1)中充有细胞培养液，述细胞培养液中含有培养基以及待扩增的细胞；所述磁性浮球(2)在浮力和磁力的合力作用下漂浮在培养液液面上；所述磁体片(41)能够在所述细胞培养袋(1)上方往复移动，从而通过磁力的作用，驱动所述磁性浮球(2)在漂浮状态下在培养液液面往复移动，所述磁性浮球(2)在培养液液面以下的部分能够搅拌培养液，从而在所述细胞培养袋(1)中模拟血液流动的体内环境；所述NK细胞体外扩增培养基组合包括：基础培养基、诱导培养基、增殖培养基和活化适应培养基；其中，所述基础培养基的组成成分包括：RPMI‑1640培养基、GT‑T551培养基、庆大霉素和BSA；所述诱导培养基的组成成分包括：RPMI‑1640培养基、GT‑T551培养基、BSA、香菇多糖、灵芝多糖、茶多酚、大蒜素和紫杉醇；所述增殖培养基的组成成分包括：RPMI‑1640培养基、GT‑T551培养基、BSA和白细胞介素；所述白细胞介素为IL‑12、IL‑15、IL‑18和IL‑21；所述活化适应培养基包括：RPMI‑1640培养基、GT‑T551培养基、胰岛素、转铁蛋白和谷氨酰胺。