[发明专利]在荧光微球表面定向包被抗体的方法及其在糖化载脂蛋白A1检测中的用途

摘要

本公开涉及一种在荧光微球表面定向包被抗体的方法及其在糖化载脂蛋白A1检测上的应用，包括：将抗体与荧光微球按照1‑4：50的质量比在pH为8.0‑8.5的反应缓冲液中结合反应20‑40min获得抗体标记微球；其中，所述荧光微球表面具有羟基官能团；所述反应缓冲液为含有0.8‑1.2mg/mL的带氨基基团的烷基硅氧烷和9‑11mg/mL的BSA的硼酸盐缓冲液。通过上述技术方案，使得抗体更倾向于以Fc区去接近荧光微球表面的羟基官能团，而使得Fab得以向外伸展。本公开的技术具有以下优点：提高抗体的利用率，改善检测灵敏度；不需共价修饰抗体，减少抗体活性的损失，当用于制备荧光免疫层析试纸条时可以有效控制试纸条的批间差；包被工艺较其他方法更加简化和易操作。

主权项

1.一种在荧光微球表面定向包被抗体的方法，其特征在于，所述方法包括如下(1)‑(6)方法中的一种或多种：(1)制备糖化载脂蛋白A1抗体溶液：用硼酸盐缓冲液将糖化载脂蛋白A1抗体透析得到糖化载脂蛋白A1抗体溶液，透析温度为4℃，透析时间18h；将糖化载脂蛋白A1抗体溶液浓度调整为1.6mg/mL；抗体的定向包被：用125μL缓冲液将2.4mg聚苯乙烯荧光微球悬浮后，加10μL糖化载脂蛋白A1抗体溶液到荧光微球悬浮液中，使所述的糖化载脂蛋白A1抗体与荧光微球的质量比为1:150，所述聚苯乙烯荧光微球为聚苯乙烯包埋有机荧光染料微球，尺寸为200nm，加入工作浓度为1mg/mL的3‑氨基丙基三乙氧基硅烷和工作浓度为10mg/mL的BSA形成反应缓冲液，室温反应30min后在15000rpm、4℃条件下离心收集得到抗体标记微球；(2)制备糖化载脂蛋白A1抗体溶液：用硼酸盐缓冲液将糖化载脂蛋白A1抗体透析得到糖化载脂蛋白A1抗体溶液，透析温度为4℃，透析时间18h；将糖化载脂蛋白A1抗体溶液浓度调整为1.6mg/mL；抗体的定向包被：用125μL缓冲液将2.4mg聚苯乙烯荧光微球悬浮后，加10μL糖化载脂蛋白A1抗体溶液到荧光微球悬浮液中，使所述的糖化载脂蛋白A1抗体与荧光微球的质量比为1:150，所述聚苯乙烯荧光微球为聚苯乙烯包埋有机荧光染料微球，尺寸为200nm，加入工作浓度为0.8mg/mL的3‑氨基丙基三乙氧基硅烷和工作浓度为9mg/mL的BSA形成反应缓冲液，室温反应30min后在15000rpm、4℃条件下离心收集得到抗体标记微球；(3)制备糖化载脂蛋白A1抗体溶液：用硼酸盐缓冲液将糖化载脂蛋白A1抗体透析得到糖化载脂蛋白A1抗体溶液，透析温度为4℃，透析时间18h；将糖化载脂蛋白A1抗体溶液浓度调整为1.6mg/mL；抗体的定向包被：用125μL缓冲液将2.4mg聚苯乙烯荧光微球悬浮后，加10μL糖化载脂蛋白A1抗体溶液到荧光微球悬浮液中，使所述的糖化载脂蛋白A1抗体与荧光微球的质量比为1:150，所述聚苯乙烯荧光微球为聚苯乙烯包埋有机荧光染料微球，尺寸为200nm，加入工作浓度为1.2mg/mL的3‑氨基丙基三乙氧基硅烷和工作浓度为11mg/mL的BSA形成反应缓冲液，室温反应30min后在15000rpm、4℃条件下离心收集得到抗体标记微球；(4)制备糖化载脂蛋白A1抗体溶液：用硼酸盐缓冲液将糖化载脂蛋白A1抗体透析得到糖化载脂蛋白A1抗体溶液，透析温度为4℃，透析时间18h；将糖化载脂蛋白A1抗体溶液浓度调整为1.6mg/mL；抗体的定向包被：用125μL缓冲液将4.8mg聚苯乙烯荧光微球悬浮后，加10μL糖化载脂蛋白A1抗体溶液到荧光微球悬浮液中，使所述的糖化载脂蛋白A1抗体与荧光微球的质量比为1:300，所述聚苯乙烯荧光微球为聚苯乙烯包埋有机荧光染料微球，尺寸为200nm，加入工作浓度为1mg/mL的3‑氨基丙基三乙氧基硅烷和工作浓度为10mg/mL的BSA形成反应缓冲液，室温反应30min后在15000rpm、4℃条件下离心收集得到抗体标记微球；(5)制备糖化载脂蛋白A1抗体溶液：用硼酸盐缓冲液将糖化载脂蛋白A1抗体透析得到糖化载脂蛋白A1抗体溶液，透析温度为4℃，透析时间18h；将糖化载脂蛋白A1抗体溶液浓度调整为1.6mg/mL；抗体的定向包被：用125μL缓冲液将1.2mg聚苯乙烯荧光微球悬浮后，加10μL糖化载脂蛋白A1抗体溶液到荧光微球悬浮液中，使所述的糖化载脂蛋白A1抗体与荧光微球的质量比为1:75，所述聚苯乙烯荧光微球为聚苯乙烯包埋有机荧光染料微球，尺寸为200nm，加入工作浓度为1mg/mL的3‑氨基丙基三乙氧基硅烷和工作浓度为10mg/mL的BSA形成反应缓冲液，室温反应30min后在15000rpm、4℃条件下离心收集得到抗体标记微球；(6)制备糖化载脂蛋白A1抗体溶液：用硼酸盐缓冲液将糖化载脂蛋白A1抗体透析得到糖化载脂蛋白A1抗体溶液，透析温度为4℃，透析时间18h；将糖化载脂蛋白A1抗体溶液浓度调整为1.6mg/mL；抗体的定向包被：用125μL缓冲液将2.4mg聚苯乙烯荧光微球悬浮后，加10μL糖化载脂蛋白A1抗体溶液到荧光微球悬浮液中，使所述的糖化载脂蛋白A1抗体与荧光微球的质量比为1:150，所述聚苯乙烯荧光微球为聚苯乙烯包埋有机荧光染料微球，尺寸为200nm，加入工作浓度为1mg/mL的(3‑氨基丙基)二甲基乙氧基硅烷和工作浓度为10mg/mL的BSA形成反应缓冲液，室温反应30min后在15000rpm、4℃条件下离心收集得到抗体标记微球。