[发明专利]VRE/MRSA/KPC/NDM‑1检测基因芯片的制备和用途

摘要

本发明涉及一种VRE/MRSA/KPC/NDM‑1检测基因芯片的制备和用途，其制备方法包括制备特异性引物，制备特异性探针，制备寡核苷酸芯片，建立多重PCR体系和杂交体系。利用本发明制备的基因芯片可同时检测5种耐药基因和3种相关的病原菌，包括抗万古霉素肠球菌VRE耐药基因VanA,VanB；编码新德里金属‑β‑内酰胺酶NDM‑1耐药基因；抗甲氧西林金黄色葡萄球菌MRSA的耐药基因mecA；编码碳青霉烯酶KPC基因；以及粪肠球菌特异基因Fddl、屎肠球菌特异基因Sddl、金黄色葡萄球菌特异基因nuc。该芯片具有快速准确、高通量等优势，为常见抗生素耐药表型的耐药基因确认提供一种新的检测手段。

主权项

一种VRE/MRSA/KPC/NDM‑1检测基因芯片的制备和用途，本发明的基因芯片可以用于同时检测5种常见的耐药基因和三种相关的病原菌，包括抗万古霉素肠球菌（vancomycin‑resistant enterococci,VRE）的耐药基因VanA、VanB；抗甲氧西林金黄色葡萄球菌（Methicillin‑resistant Staphylococcus aureus，MRSA）的耐药基因mecA；可编码新德里金属‑β‑内酰胺酶（New Delhi metallo‑β‑lactamase）NDM‑1耐药基因；编码碳青霉烯酶KPC基因；以及粪肠球菌特异基因Fddl、屎肠球菌特异基因Sddl和金黄色葡萄球菌特异基因nuc；其特征是包含（1）检测上述基因的8对特异性引物和2对细菌内标引物；（2）8条耐药基因特异性寡核苷酸探针；（3）芯片质量控制寡核苷酸探针；；（4）寡核苷酸探针固化在载体材料上形成的探针阵列；；所谓的寡核苷酸探针是指能与目的基因杂交的多聚寡核苷酸，长度在27‑42nt；所谓的特异性引物是指根据基因序列的保守区设计的寡核苷酸，可以扩增出特异性基因，长度在18‑25nt；所谓的质量控制寡核苷酸探针至少包括两种探针，即阳性对照，阴性对照：阳性对照用于检测是否正常杂交和准确定位，阴性对照用于检测杂交信号错误或污染；所谓的载体材料选自玻片、金属片、硅片、硝酸纤维素；表1 特异性扩增引物表2 特异性寡核苷酸探针序列。