[发明专利]一种免疫细胞的体外诱导扩增、冻存和复苏的方法

摘要

本发明公开了免疫细胞的体外诱导扩增、冻存和复苏的方法。该方法包括利用CD16抗体包被培养容器，得到包被后的培养容器；利用免疫细胞激活培养基将单个核细胞置于包被后的培养容器中进行第一诱导扩增培养，得到初步诱导扩增的免疫细胞；利用免疫细胞扩增培养基将初步诱导扩增的免疫细胞进行第二诱导扩增培养，得到分化的免疫细胞；利用免疫细胞规模化扩增培养基将分化的免疫细胞进行第三诱导扩增培养，获得大规模的功能激活的免疫细胞；利用免疫细胞冻存液冻存免疫细胞，得到冻存的免疫细胞；将冻存的免疫细胞水浴融化，并与免疫细胞的冷冻复苏液混合，得到复苏细胞混合液；将复苏细胞混合液进行离心处理，得到复苏的免疫细胞。

主权项

一种免疫细胞的体外诱导扩增、冻存和复苏的方法，其特征在于，包括：利用CD16抗体包被培养容器，以便得到包被后的培养容器；利用免疫细胞激活培养基将单个核细胞置于所述包被后的培养容器中进行第一诱导扩增培养，以便得到初步诱导扩增的免疫细胞；利用免疫细胞扩增培养基将所述初步诱导扩增的免疫细胞进行第二诱导扩增培养，以便得到分化的免疫细胞；利用免疫细胞规模化扩增培养基将所述分化的免疫细胞进行第三诱导扩增培养，以便获得大规模的功能激活的免疫细胞；利用免疫细胞冻存液冻存所述大规模的功能激活的免疫细胞，以便得到冻存的免疫细胞；将所述冻存的免疫细胞置于37‑42℃水浴中融化，并与免疫细胞的冷冻复苏液混合，以便得到复苏细胞混合液；以及将所述复苏细胞混合液进行离心处理，以便得到复苏的免疫细胞，其中，所述免疫细胞激活培养基为添加了第一血浆、白介素‑2和沙培林的无血清淋巴细胞培养基；所述免疫细胞扩增培养基为添加了白介素‑2和沙培林的无血清淋巴细胞培养基；所述免疫细胞规模化扩增培养基为添加了白介素‑2的无血清淋巴细胞培养基；所述免疫细胞冻存液包含2‑10体积％的DMSO、2‑15体积％的HSA、20‑88体积％的第二血浆和余量冻存培养基；所述冷冻复苏液包含白蛋白和右旋糖酐；所述沙培林的浓度均为0.007‑0.013KE/ml，所述免疫细胞激活培养基、所述免疫细胞扩增培养基和所述免疫细胞规模化扩增培养基中，所述白介素‑2的浓度均为700‑1300IU/ml，所述免疫细胞激活培养基、所述免疫细胞扩增培养基和所述免疫细胞规模化扩增培养基中，所述无血清淋巴细胞培养基均为OpTmizer TMCTSTM无血清培养基或SuperCulture TM L500人淋巴细胞无血清培养基，所述免疫细胞激活培养基中，所述第一血浆的浓度为7‑13体积％；所述冻存培养基为1640培养基或Stemspan培养基。