[发明专利]液质联用快速测定鱼肉中河鲀毒素含量的方法

摘要

本发明公开了一种液质联用快速测定鱼肉中河鲀毒素含量的方法，包括下列步骤（1）样品预处理；（2）色谱‑质谱检测。发明针对鱼肉样品中的基质效应问题，结合河鲀毒素的化学特点，在前处理时加入硅藻土，并采用超低温冷冻的方式，最大程度的将毒素从肌肉组织中分离出来。样品经1%乙酸甲醇在60℃细胞破碎仪超声提取，Carbon‑GCB SPE小柱净化后，直接进样分析，节省了浓缩时间。与现有技术中0.2%乙酸水溶液提取、其它SPE净化以及超滤等方法相比，样品直接进样分析，处理过程简捷、低耗，方法准确，操作方便、重现性好。

主权项

液质联用快速测定鱼肉中河鲀毒素含量的方法，其特征在于，包括下列步骤：(1)样品预处理活鱼冷冻处死，去皮，取其肌肉部分50g，加入肌肉重量10‑20％的硅藻土，经均质制样机充分粉碎，均质粉碎20‑25min，然后放入‑80℃冰箱中冷冻2‑3h；冷冻结束后称取试样(1.00±0.01)g于50mL聚丙烯离心管中，准确加入2‑3g氯化钙和1.0％乙酸甲醇溶液5‑10mL，均质30‑100s，用细胞破碎仪在60℃超声提取20‑40min，8000r/min离心5min，转移上清液至另一洁净离心管中；残渣用3mL的1％乙酸甲醇溶液重复提取1次，合并上清液并于4℃10 000r/min离心5min，所得上清液待净化；取1.0mL上清液过Carbon‑GCB石墨化碳黑SPE固相萃取小柱，控制流速2mL/min,弃去流出液；再取1mL上清液以2mL/min流速通过小柱，流出液过0.22μm聚四氟乙烯‑尼龙复合膜，收集于进样小瓶，供HPLC‑MS/MS测定；(2)色谱‑质谱条件1.色谱条件色谱柱：Zic‑Hilic(100mm×2.1mm i.d.，3.5μm)；流动相A为0.1％甲酸水溶液(含5mmol/L甲酸铵)；流动相B为95％乙腈(含5mmol/L甲酸铵的0.1％甲酸水溶液)；洗脱程序为：0‑5min，从20％线性递增到95％；5‑7min，7‑7.01min从95％线性递减至20％；7.01‑12min，平衡6min；进样量：10μL；流速0.35mL/min；柱温：30℃；TTX的液相色谱梯度洗脱条件时间(min)流速(μL/min)A相(％)B相(％)0.035020805.03509557.03509557.01350208012.035020802.质谱条件离子源及扫描方式：ESI+；检测模式：MRM；碰撞气流量：12L/min；气帘气流量：10L/min；TTX的质谱定性、定量离子对分别为320.2/162.1和320.2/302.2，相应碰撞能分别为32V和47V；质谱峰保留时间在6.06，驻留时间和电喷雾电压分别为200ms和5000V，离子源温度为600℃，各质谱参数见下表：TTX保留时间、定性定量离子对、去簇电压和碰撞能量*定量离子对。