[发明专利]一种实时检测烟气暴露条件下动物脑内单胺类神经递质变化的方法

摘要

一种实时检测烟气暴露条件下动物脑内单胺类神经递质变化的方法，其特征在于：采用动物口鼻式吸入烟气暴露系统将动物实时暴露于烟气中，通过在线微透析技术收集动物脑组织样品，再利用高效液相色谱‑库仑阵列电化学检测器对脑透析液样品中的单胺类神经递质及其代谢物进行快速分析，从而实时监测烟气暴露前后动物脑内单胺类神经递质的变化特征。本方法对动物的烟气暴露更加接近于人类吸食烟草制品的方式，克服了无法实时模拟、评价烟气吸入（烟碱摄入）引起的单胺神经递质变化的技术难题，具有操作简便、结果准确可靠等优点，与现有技术相比取得了明显进步，开创了一种新的用于烟气暴露后动物脑内单胺类神经递质代谢变化的监测方法。

主权项

1.一种实时检测烟气暴露条件下动物脑内单胺类神经递质变化的方法，其特征在于：采用动物口鼻式吸入烟气暴露系统将动物实时暴露于烟气中，通过在线微透析技术收集动物脑组织样品，再利用高效液相色谱‑库仑阵列电化学检测器对脑透析液样品中的单胺类神经递质及其代谢物进行快速分析，从而实时监测烟气暴露前后动物脑内单胺类神经递质的变化特征，具体步骤如下：a. 烟气暴露：利用吸烟机抽吸卷烟或采用气溶胶发生器使电子烟液产生气溶胶，将头部装有微透析探针导管的动物放入一个专用的实验动物固定夹持器，以使该夹持器挟持动物仅以口鼻吸入方式暴露于一定浓度的烟气中；b. 脑微透析样品收集：运行微透析系统后将微透析探针插入动物头部的导管中连续收集动物脑透析液于在线进样器的定量环中，每隔一定时间通过在线进样器自动注入运行的高效液相色谱中；色谱条件具体如下：色谱柱：Discovery HS F5柱，规格4.6 mm ×150 mm，3 μm；柱温：30 ℃；流动相：A：甲醇，B：缓冲盐液，含有40 mmol/L柠檬酸、20 mmol/L磷酸氢二钠和0.3 mmol/L EDTA；流速：0.25 mL/min；根据各目标物的伏安曲线设置库仑阵列电化学检测器的多通道工作电势为：‒50、0、50、175、200、350、400、500 mV；梯度洗脱条件如下表：时间（min）流动相A（%）流动相B（%）0109042575132575141090c. 高效液相色谱‑库仑阵列电化学检测器分析：设定梯度洗脱程序和进样序列并运行高效液相色谱‑库仑阵列电化学检测器检测微透析样品，使得每个样品的检测时间略小于该样品的收集时间；d. 标准溶液配制及标准曲线绘制：配制含有多巴胺(DA)、3,4‒二羟基苯乙酸(DOPAC)、高香草酸(HVA)、5‑羟色胺(5‑HT)和5‒羟吲哚乙酸(5‑HIAA) 5种标准品的系列混合标准溶液，将系列混合标准溶液按由低到高的浓度顺序进行高效液相色谱‑库仑阵列电化学检测器分析，以各目标分析物的色谱峰面积（Y）对其相应的浓度（X）进行线性回归，得到标准曲线回归方程；e. 数据分析及处理：根据标准曲线法计算透析液样品中各目标物的含量，依据结果分别绘制烟气暴露前、后各时间点脑内单胺类神经递质及其代谢物的浓度‑时间变化曲线，揭示烟气暴露引起脑内单胺类神经递质变化的规律。