[发明专利]一种鸭肝微粒体的制备方法在审
申请号: | 201611253896.X | 申请日: | 2016-12-30 |
公开(公告)号: | CN108265022A | 公开(公告)日: | 2018-07-10 |
发明(设计)人: | 张清;蒋敏;齐来俊 | 申请(专利权)人: | 江苏齐氏生物科技有限公司 |
主分类号: | C12N5/071 | 分类号: | C12N5/071 |
代理公司: | 暂无信息 | 代理人: | 暂无信息 |
地址: | 214434 江苏省无锡市江阴市东*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | 本发明提供一种鸭肝微粒体的制备方法,包括步骤:(a)断头处死实验鸭,无菌条件下,清洗液灌洗肝脏;(b)取出肝脏,离体灌洗肝脏,进一步清洗肝中残血;(c)按一定的肝湿重比加入预冷的匀浆缓冲液,充分剪碎,冰浴中匀浆;(d)将肝脏匀浆液低速离心,分别收集上清和沉淀,沉淀加入一定量预冷的匀浆缓冲液重悬,超声破碎,肝脏匀浆液经冷冻高速离心后收集上清;(e)转移至超速离心管中,超速离心后弃上清,加入储存液重悬,再次超速离心,所得沉淀经储存液重悬分装;(f)HPLC检测鸭肝微粒体亚型酶CYP3A4和CYP2E1的活性。 | ||
搜索关键词: | 超速离心 微粒体 鸭肝 重悬 沉淀 肝脏 肝脏匀浆液 匀浆缓冲液 储存液 灌洗 预冷 制备 冷冻高速离心 超声破碎 低速离心 无菌条件 清洗液 断头 冰浴 残血 分装 剪碎 离体 湿重 亚型 匀浆 清洗 取出 | ||
【主权项】:
1.一种鸭肝微粒体的制备方法,其特征在于:(a)断头处死实验鸭,无菌条件下,清洗液灌洗肝脏;(b)取出肝脏,离体灌洗肝脏,进一步清洗肝中残血;(c)按一定的肝湿重比加入预冷的匀浆缓冲液,充分剪碎,冰浴中匀浆;(d)将肝脏匀浆液低速离心,分别收集上清和沉淀,沉淀加入一定量预冷的匀浆缓冲液重悬,超声破碎,肝脏匀浆液经冷冻高速离心后收集上清;(e)转移至超速离心管中,超速离心后弃上清,加入储存液重悬,再次超速离心,所得沉淀经储存液重悬分装;(f)HPLC检测鸭肝微粒体亚型酶CYP3A4和CYP2E1的活性。
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