[发明专利]将多种表达构建体引入真核细胞的方法

摘要

本发明涉及将多种表达构建体引入真核细胞的方法，构建具有多个靶基因座以用于表达多种感兴趣的异源蛋白质的真核细胞的方法，用于表达多种感兴趣的异源蛋白质的真核细胞，以及产生多种感兴趣的异源蛋白质的方法。

主权项

一种将多种表达构建体引入真核细胞的两个或更多个靶基因座的方法，所述方法包括：(a)用一个或多个第一构建体和一个或多个第二构建体转化真核细胞群体，其中该真核细胞包含(1)一个或多个第一靶基因座，每个第一靶基因座包含一对第一重组识别位点和第二重组识别位点，和(2)一个或多个第二靶基因座，每个第二靶基因座包含缺少选择性功能的第一选择性标记的第一片段；其中所述一个或多个第一构建体各自包含一个或多个第一表达盒，每个第一表达盒包含编码感兴趣的第一蛋白的第一多核苷酸，其中在每个第一构建体中所述一个或多个第一表达盒在一侧由第一重组识别位点侧翼，并且在另一侧由与该第一靶基因座的相同重组识别位点对应的第二重组识别位点侧翼；并且其中所述一个或多个第二构建体各自包含一个或多个第二表达盒，每个第二表达盒包含编码感兴趣的第二蛋白的第二多核苷酸，并且其中在每个第二构建体中所述一个或多个第二表达盒在一侧由对应的第二靶基因座的同源区侧翼，并且在另一侧由该缺少选择性功能的第一选择性标记的第二片段侧翼，其中该第二片段包含与该第二靶基因座的第一选择性标记的第一片段的相应序列同源重叠的序列；并且(b)使用每个第一选择性标记来选择转化体，其中每个第一选择性标记的第一片段和第二片段进行重组以变得有功能，并且第二构建体的同源区与第二靶基因座的同一相应区域进行同源重组，其中将每个第二表达盒整合在相应的第二靶基因座处，并且其中第一构建体的第一和第二重组识别位点在第一靶基因座的相应第一和第二重组识别位点处进行重组，该重组由至少一种重组酶驱动，该重组酶将每个第一表达盒整合在相应的第一靶基因座处。