[发明专利]分裂循环和TAPE扩增

摘要

本文描述了用于定量检测核酸样品中的序列的方法和组合物。该方法通常涉及将核酸样品分配到离散反应室中的大量混合物分区中。另一方面，在标记扩增子引物延伸(TAPE)反应中分析分配的样品。在TAPE反应中，使用一对5＇‑加尾扩增引物，一个5＇‑加尾正向引物和一个5＇‑加尾反向引物扩增靶序列。在另一方面，本发明提供了对核酸样品中的野生型和突变型靶核酸片段的频率进行定量的方法。

主权项

1.多个混合物分区，单个混合物分区包含：i)突变特异性5′‑加尾引物对，其中突变特异性5′‑加尾引物对与靶DNA模板分子杂交并特异性扩增靶DNA模板分子，所述靶DNA模板分子来自包含如果存在的突变靶序列的核酸样品，其中所述突变特异性5＇‑加尾引物对的引物包含：a)长度为至少10个核苷酸且小于30个核苷酸的3＇杂交区域，其与突变靶序列特异性杂交；和b)长度为至少10个核苷酸且不超过30个核苷酸的突变特异性5′尾区，其不与核酸样品中的任何核酸片段杂交；ii)野生型特异性5′‑加尾引物对，其中野生型特异性5′‑加尾引物对杂交并特异性扩增包含如果存在的野生型靶序列的靶DNA模板分子，其中所述野生型特异性5′‑加尾引物对的引物包含：a)长度为至少10个核苷酸且小于30个核苷酸的3′杂交区域，其与野生型靶序列特异性杂交；和b)长度为至少10个核苷酸且不超过30个核苷酸的野生型特异性5′尾区，其不与核酸样品中的任何核酸片段杂交，其中野生型特异性5′尾区是与突变特异性5′尾区不同的序列；和iii)突变特异性侧翼引物对，其中所述突变特异性侧翼引物对杂交并特异性扩增包含如果存在的突变特异性5′‑加尾引物对的5′尾区的扩增子；iv)野生型特异性侧翼引物对，其中所述野生型特异性侧翼引物对杂交并特异性扩增包含如果存在的野生型特异性5′‑加尾引物对的5′尾区的扩增子；和v)热稳定聚合酶，其中所述多个混合物分区的至少约1‑10个混合物分区含有包含野生型或突变型靶序列的靶DNA模板分子；并且所述多个混合物分区的至少约3‑10个混合物分区不包含靶DNA模板分子。