[发明专利]用于减少接头-二聚体形成的方法和试剂盒在审

专利信息
申请号: 201680079111.3 申请日: 2016-11-17
公开(公告)号: CN108473985A 公开(公告)日: 2018-08-31
发明(设计)人: M·托路易;A·莫里斯;K·艾伦 申请(专利权)人: 柏尔科学公司
主分类号: C12N15/10 分类号: C12N15/10;C12Q1/6855
代理公司: 北京北翔知识产权代理有限公司 11285 代理人: 孙占华;淳于媛
地址: 美国德*** 国省代码: 美国;US
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摘要: 本教导涉及用于减少接头‑二聚体形成的方法,特别是当制备用于随后扩增和/或测序的目的核酸时。还描述了用于实施某些公开的方法的试剂盒。
搜索关键词: 二聚体形成 试剂盒 测序 核酸 扩增 制备
【主权项】:
1.一种用于减少接头‑二聚体形成的方法,其包括:将包含靶核酸的样品、至少一种3’接头和至少一种第一连接酶合并以形成第一反应组合物;在适于产生第一连接产物的条件下孵育所述第一反应组合物,以形成第二反应组合物,其包括第一连接产物和至少一些未连接的3’接头;将至少一种包含逆转录引发位点的寡核苷酸与所述第二反应组合物合并,以形成第三反应组合物;在适于至少一些寡核苷酸与至少一些所述第一反应产物和至少一些所述未连接的3’接头退火的条件下,孵育所述第三反应组合物,以形成包含单链5’悬垂部分的3’接头‑寡核苷酸双链体;将至少一种DNA聚合酶与所述第三反应组合物合并,并在适于所述聚合酶将至少一些包含单链5’悬垂部分的3’接头‑寡核苷酸双链体转化为双链的接头‑寡核苷酸双链体的条件下孵育;和将至少一种第二连接酶和至少一种5’接头与包括双链的接头‑寡核苷酸双链体和第一连接产物的第三反应组合物合并,并且在适于形成至少一些第二连接产物的条件下孵育,从而减少接头‑二聚体形成。
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