[发明专利]通过对微生物代谢途径的基因修饰来制备伸长的2-酮酸和其C5-C10化合物的方法

摘要

描述了基因修饰的LeuCD'酶复合物，利用基因修饰的LeuCD'酶复合物制备C₇‑C₁₁2‑酮酸的方法，以及包括修饰的LeuCD酶复合物的微生物有机体。本发明公开的基因修饰的LeuCD'酶复合物，制备C₇‑C₁₁2‑酮酸的方法以及包括修饰的LeuCD'酶复合物的微生物有机体可特别用于在体内和体外产生C₆‑C₁₀醛、烷烃、醇和羧酸。

主权项

1.一种制备C₇-C₁₁ 2-酮酸的方法，所述方法包括：(I)提供C₄-C₁₀ 2-酮酸底物中的至少一种与/n(A)至少一种具有异丙基苹果酸合成酶活性的异丙基苹果酸合成酶；/n(B)至少一种具有异丙基苹果酸脱氢酶活性的异丙基苹果酸脱氢酶；和/n(C)至少一种基因修饰的LeuCD'酶复合物，其包括：/n(1)LeuC亚基，其选自由以下组成的群组：/n(i)天然LeuC亚基，其包括与SEQ ID NO:1具有至少80％同源性的氨基酸序列；和/n(ii)基因修饰的LeuC'亚基，其包括与SEQ ID NO:1具有至少80％同源性的氨基酸序列和至少一个修饰，其中丙氨酸、甘氨酸或缬氨酸独立地取代Val-35、Leu-411或其组合；和/n(2)LeuD亚基，其选自由以下组成的群组：/n(i)天然LeuD亚基，其包括与SEQ ID NO:2具有至少80％同源性的氨基酸序列；和/n(ii)基因修饰的LeuD'亚基，其包括与SEQ ID NO:2具有至少80％同源性的氨基酸序列和至少一个修饰，其中丙氨酸、甘氨酸、缬氨酸或丝氨酸独立地取代Leu-31、His-88或其组合；/n在所述C₄-C₁₀ 2-酮酸底物中的至少一种转化为所述C₇-C₁₁ 2-酮酸的条件下；/n其中所述至少一种基因修饰的LeuCD'酶复合物包含(I)(C)(1)(i)和(I)(C)(2)(ii)的组合、(I)(C)(1)(ii)和(I)(C)(2)(ii)的组合、或(I)(C)(1)(ii)和(I)(C)(2)(i)的组合；其中所述至少一种基因修饰的LeuCD'酶复合物具有异丙基苹果酸异构酶活性；以及其中所述C₄-C₁₀ 2-酮酸底物中的至少一种通过一种或多种生化反应转化为所述C₇-C₁₁2-酮酸。/n