[发明专利]一种免疫微球层析快速HIT抗体检测试纸

摘要

本发明涉及临床肝素诱导的血小板减少症(HIT)检测的技术领域，具体涉及了一种免疫微球层析肝素/血小板因子4抗体检测试纸。包括如下步骤：制备抗体复合物；试纸条载体膜的准备，蛋白A乳胶颗粒制备,反应垫的制备、样品垫标记、分离膜组装、试纸条的组装、临床样本检测,并将干燥的试纸条置于铝箔袋内。本发明HIT抗体的侧流免疫检测方法具有较高成本效益，并定量检测和评估HIT抗体在患者的体液中的水平。该方法用于POCT检测系统，以及筛选或检测患者体液中HIT抗体的滴度变化以确定对HIT敏感的检测方法，能够使HIT抗体检测技术成为临床常规检测项目。

主权项

1.一种免疫微球层析快速HIT抗体检测试纸，可以在临床帮助诊断患者中肝素诱导的血小板减少症抗体，包括使用即时免疫层析定量或定性测定患者中肝素‑PF4复合物诱导的免疫球蛋白抗体的体液水平是否高于预定范围，其特征在于，包括如下步骤：S1、制备肝素‑PF4复合物，将缓冲液配制的肝素制剂与血小板4因子在室温条件按照以下体积比1:1‑1:5但不限于该比例进行混合孵育，向反应液中加入10％‑50％的糖类物质作为稳定剂；S2、蛋白A颗粒制备,选用但不限于染色后的乳胶微球、荧光微球、制备包被有蛋白A用于显色，便于仪器定量或定性检测肝素/PF4抗体浓度；S3、反应膜的制备，其特征在于反应垫包括但不限于NC膜，硝酸纤维膜、醋酸纤维膜，反应垫上质控线与检测线各一条，检测线固定喷涂有S1步骤肝素/PF4复合物，质控线固定喷涂有人免疫球蛋白抗体。S4、样品垫制备,应用但不限于玻璃纤维膜、硝酸纤维素膜、醋酸纤维素膜、NC膜，用一种或几种防腐剂、表面活性剂、血清白蛋白、氯化钠、糖类试剂进行浸泡，置于37‑56℃干燥处理，储存于密封包装袋中待用；S5、颗粒标记的样品垫，在干燥后的S4样本垫近端标记S2中的蛋白A颗粒试剂，置于37‑56℃干燥处理；S6、血液分离膜组装，将测试条的样品垫上加入血液分离膜，用于分离血细胞，允许分离后的血浆或血清进入样品垫；S7、试纸条的组装，将S5中标记蛋白A的样本垫组装到带有黏胶载体塑料板一端，用力按压，将一种不限于硝酸纤维素膜或NC膜组装于试纸条中部，试纸条的另一端粘贴吸水膜，维持样品侧向层析，将试纸条放入塑料盒中，将样品垫的一段放置在塑料盒底部，吸水纸一端固定于塑料盒顶端；临床样本检测，室温下在试纸条的样品垫部位加入全血样本，反应；在步骤S1中的制备肝素‑PF4复合物，肝素制剂和血小板因子4的缓冲液包括但不限于磷酸盐、Tris、HEPES等常规的缓冲液。在步骤S1中肝素制剂和血小板因子4的混合比例包括但不限于体积比1:1‑1:5进行混合反应，在步骤S1中加入的糖类物质包括但不限于加入蔗糖、海藻糖、葡萄糖等糖类，糖类物质加入比例包括但不限于10％‑50％。在步骤S2中的蛋白A颗粒制备的显色颗粒包括但不限于染色微球、荧光微球。在步骤S3中的样品垫处理试剂表面活性剂包括但不限于吐温、曲拉通等，血清白蛋白包括但不限于牛血清白蛋白、人血清白蛋白等，糖类物质包括但不限于加入蔗糖、海藻糖、葡萄糖等糖类。