[发明专利]液相色谱-串联质谱法检测组织亚油酸含量的方法及结直肠癌诊断试剂盒

摘要

本发明提供一种液相色谱‑串联质谱法检测组织亚油酸含量的方法及结直肠癌诊断试剂盒，将组织样本在液氮中研磨成粉，将组织粉末用含有BHT的冰甲醇均质，离心；向上清液中加入内标，用正丁醇于生处理，用流动相重新分散溶解，得到待上样检测样品；对待上样检测样品利用液相色谱‑串联质谱法进行分析，得到组织样本中亚油酸的含量。另外，进一步对亚油酸通路的代谢酶进行表达分析，结果提示亚油酸通路中FADS1，FADS2，ELOVL2以及ELOVL5的基因表达都增加。本发明通过对结直肠癌患者的肿瘤组织与正常组织亚油酸含量变化以及相关代谢通路中基因的表达变化进行检测，为结直肠癌的诊治，以及后期的营养学支持提供重要参考。

主权项

1.一种液相色谱‑串联质谱法检测组织亚油酸含量的方法，其特征在于：包括以下步骤：1)将50～110mg组织样本在液氮中研磨成粉，将研磨得到的组织粉末用含有0.1％2,6‑二叔丁基‑4‑甲基苯酚的冰甲醇均质后进行离心，取离心得到的上清液；2)向15～20μL上清液中加入亚油酸同位素内标，放置25～35min后离心，将离心得到的上清液经氮气吹干后用50～60μL正丁醇于60～65℃衍生处理20～30min，然后氮气吹干，用100～150μL流动相重新分散溶解，得到待上样检测样品；3)对待上样检测样品利用液相色谱‑串联质谱法进行分析，得到组织样本中亚油酸的含量；所述液相色谱的工作条件包括：流动相是将0.6～1mL 50％的乙酸水溶液与1000mL乙腈水溶液混合而制成的，所述乙腈水溶液中乙腈与水的体积比为(7～8):(2～3)；流动相采用梯度流速。