[发明专利]一种提高苹果转基因材料再生效率的方法

摘要

本发明公开了一种提高苹果转基因材料再生效率的方法，包括：圆叶海棠组培苗在扩繁培养基中培养一个月，将茎基部的愈伤用手术刀切下，然后将再生的茎段移植到新的培养基中；再生的茎段在扩繁培养基中培养一个月，取完全伸展的功能叶横切中脉两至三刀，农杆菌侵染后转接到预分化培养基中，暗培养2‑4天后转移到分化培养基中，暗培养2周后光下培养，直至分化出抗性芽；将抗性芽移植到继代培养基中进一步培养20‑30天；挑选株高达到1.5cm的再生植株移植到生根培养基，培养一个月进行移栽。本发明离体叶片再生效率达到80.33％，扩繁系数达到8.2，生根率达到96.38％。

主权项

1.一种提高苹果转基因材料再生效率的方法，其特征在于，所述提高苹果转基因材料再生效率的方法包括以下步骤：步骤一，圆叶海棠组培苗在扩繁培养基中培养一个月，将茎基部的愈伤用手术刀切下，然后将再生的茎段移植到新的继代培养基中；步骤二，再生的茎段在扩繁培养基中培养一个月，取完全伸展的功能叶横切中脉两至三刀，农杆菌侵染后转接到预分化培养基中，培养2‑4天后转移到分化培养基中，暗培养2周后光下培养，直至长出抗性芽，期间可以更换培养基；步骤三，将抗性芽移植到继代培养基中进一步培养20‑30天；步骤四，挑选株高达到1.5cm的再生植株移植到生根培养基，培养一个月进行移栽；所述步骤一和步骤三光下培养的条件光照16h/d、光照2000lux，温度为25℃，平均湿度为70–80％；所述继代培养基为MS培养基，由IBA0.1mg/L，6‑BA0.6mg/L，琼脂8g/L和蔗糖30g/L组成，pH为5.8；所述预分化培养基由MS培养基、2.0mg/LN‑苯基‑N‑1,2,3‑噻二唑‑5‑脲、0.2mg/L吲哚丁酸、琼脂8g/L和蔗糖30g/L组成，pH为5.8；所述分化培养基为MS培养基，由2.0mg/LN‑苯基‑N‑1,2,3‑噻二唑‑5‑脲、0.2mg/L吲哚丁酸、200mg/L头孢霉素、50mg/L卡那霉素、琼脂8g/L和蔗糖30g/L组成，pH为5.8；所述生根培养基为1/2MS培养基，由IBA0.9mg/L组成，pH为5.8。