[发明专利]一种用于抗生素检测的磁控适配体传感器制备方法

摘要

本发明涉及一种用于抗生素残留检测的MCNCs/PMAA磁控拉曼适配体传感器制备方法。该方法为：以制备的具有高饱和磁化率及生物相容性的磁性纳米微球MCNCs/PMAA螯合适配体作为捕获探针，包埋对巯基苯胺的Au@SiO₂核壳纳米颗粒作为增强基底螯合适配体短链互补DNA作为信号分子，利用适配体技术结合表面增强拉曼光谱技术构建传感器实现抗生素残留检测研究。当抗生素存在时，影响适配体在检测体系中的结构，与适配体发生特异性识别结合，从而引起不同浓度信号分子在不同浓度抗生素存在下的释放，随后对检测体系进行磁力吸附，上清液中释放的自由信号分子可对拉曼信号进行不同程度的放大，依据不同拉曼强度的标记物拉曼特征峰图谱，实现抗生素残留灵敏间接检测的目的。

主权项

1.一种用于抗生素残留检测的MCNCs/PMAA磁控拉曼适配体传感器制备方法，其特征在于，该方法包括如下具体步骤：1)MCNCs/PMAA磁性纳米微球制备：利用溶剂热法合成MCNCs，首先，称取1.350g FeCl3·6H2O，3.854g醋酸钠，0.400g柠檬酸钠溶解在装有70mL乙二醇的250mL三口圆底烧瓶中，随后，上述溶液在氩气保护下加热到300℃，并持续反应1h，形成均匀的黑红色溶液；待溶液冷却至室温，将其转移到至100mL聚四氟乙烯内衬不锈钢反应釜中，在200℃下密封、加热反应17小时；最后，通过磁分离收集的方法，以乙醇和超纯水清洗多次，最后分散至10mL乙醇中，得到黑色MCNCs纳米微球待用；随后在MCNCs表面修饰PMAA壳，修饰之前，首先在其表面修饰改性聚苯乙烯MPS，具体操作步骤为，将40mL乙醇、10mL超纯水、1.5mL氨水及0.3g MPS添加至上述10mL MCNCs乙醇溶液中，并在60℃水浴环境下磁力震荡反应24h；最后，利用蒸馏沉淀聚合法以甲基丙烯酸AA、甲叉双丙烯酰胺MBA作为交联剂，偶氮二异丁腈AIBN为引发剂，在乙腈溶剂中制备MCNCs/PMAA磁性纳米微球；2)MCNCs/PMAA‑适配体捕捉探针制备：具有羧基表面的MCNCs/PMAA磁性纳米微球和具有氨基表面的核酸适配体利用缩合反应制备得到MCNCs/PMAA‑适配体螯合物；具体操作步骤为：取1mL羧基化的MCNCs/PMAA分散至2mL EDC水溶液中，随后，将含有1mL 1μM核酸适配体的PBS溶液加入至上述溶液中混合反应12h，最终得到MCNCs/PMAA‑适配体捕捉探针；3)增强基底APS制备：将制备的金纳米颗粒与对巯基苯胺PATP乙醇溶液室温下反应约4h，得到Au/PATP；随后，将APTMS逐滴加入混合溶液中，反应15min后，将5mL硅酸钠加入溶液中，在90℃水浴环境下反应30min，得到增强基底待用；4)信号分子cDNA‑APS制备：搅拌15分钟后，将增强基底进行离心分离，弃上层液体，获得的沉淀用乙醇和乙腈分别清洗三次，在60℃下干燥1h，随后与溶解在乙腈溶剂中的三聚氯氰连续搅拌反应4h；此后，将产物进行离心，弃上层液体，获得的沉淀用乙腈、超纯水、硼酸盐缓冲液BBS分别清洗3次；最终产物再分散在BBS溶液中，将0.4mL cDNA BBS溶液加入其中，室温下轻微震动连续反应过夜；5)基于拉曼光谱的四环素残留检测：首先，将制备的MCNCs/PMAA‑aptamer捕捉探针与cDNA‑APS信号分子混合，37℃下连续震荡反应2h；随后,分别取200μL MCNCs/PMAA‑aptamer/cDNA‑APS生物螯合物分装至一系列平行离心管中，随后，将100μL不同浓度的待检物抗生素原液依次加入到上述离心管中，混合溶液37℃条件下连续震荡反应70min；以加有100μL超纯水的离心管作为对照组；反应结束后，利用磁铁进行MCNCs/PMAA‑aptamer‑抗生素磁性富集，同时利用拉曼光谱在150cm‑1‑2000cm‑1波长范围内对含有不同浓度信号分子的上清液拉曼强度进行测定。