[发明专利]尖孢镰刀菌株及其在制备3β，7α，15α-三羟基雄甾-5-烯-17-酮中的应用

摘要

本发明公开了一株具有立体选择性羟化酶活性的尖孢镰刀菌株（Fusarium oxysporum LZ0202），已于2013年3月20日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC 7276，属于生物催化技术领域。该菌株能对去氢表雄酮的7α，15α位置进行羟基化。通过尖孢镰刀菌对去氢表雄酮进行微生物转化得到7α，15α‑二羟基雄烯醇酮，转化率为69.1%以上，该化合物是合成第四代口服避孕药屈螺酮的重要中间体，其收率决定着终产物屈螺酮的总收率。对有效地利用宝贵的皂素资源，开发高端激素药物，促进我国皮质激素制药工业的发展具有深远意义。

主权项

1.尖孢镰刀菌在制备3β，7α，15α‑三羟基雄甾‑5‑烯‑17‑酮中的应用，其特征在于，通过如下方法实现：（1）斜面培养：葡萄糖30 g/L，蛋白胨12 g/L，酵母膏1 g/L，磷酸二氢钾2 g/L，琼脂30 g/L， pH 4.5，121℃灭菌20分钟，灭菌后冷却，制成斜面，接种尖孢镰刀菌菌株，30℃培养5天，作为斜面活化种子；所述尖孢镰刀菌（Fusarium oxysporum LZ0202）保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为：CGMCC No. 7276；（2）初始发酵培养：麦芽糖26.5 g/L，蛋白胨14.5 g/L，酵母膏0.2 g/L，磷酸二氢钠1 g/L，pH5，121℃灭菌20分钟，灭菌后冷却；将尖孢镰刀菌菌株用接种针从斜面上取三接种环菌丝接种在含有100 mL发酵培养基的500mL锥形瓶中，菌丝接种量25mL，于30℃，摇床转速 210 r/min，培养2天，得发酵液；（3）底物的添加：将底物DHEA溶于丙酮中，以100 mg/瓶的浓度加入到含上述发酵液的500 mL锥形瓶中，发酵液装入量100 mL，30℃、210 r/min发酵反应96小时；(4) 转化产物的后处理：反应结束后，将菌体与转化清液分离，用乙酸乙酯分别萃取菌体与清液3次，合并乙酸乙酯，在乙酸乙酯相中依次加入饱和碳酸氢钠溶液、饱和氯化钠溶液、蒸馏水进行洗涤，无水硫酸钠干燥后再将乙酸乙酯进行减压蒸馏，得到淡黄色固体，转化产物经柱层析分离，得3β，7α，15α‑三羟基雄甾‑5‑烯‑17‑酮。