[发明专利]一种越橘提取物的鉴别及其中原花青素含量的测定方法

摘要

本发明涉及一种越橘提取物的鉴别及其中原花青素含量的测定方法，解决了现有技术越橘提取物鉴别及其原花青素含量测定相互独立、步骤繁琐、测定结果不准确的技术问题。本发明通过越橘提取物前期处理，分别制备供试品溶液A、供试品溶液B及花青素标准品溶液C，运用HPLC法对上述溶液检测分析，将供试品溶液B与越橘提取物标准品的液相色谱图对比，鉴别越橘提取物真假；按外标法通过供试品溶液A和供试品溶液B中花青素含量的差值，得出试样中原花青素的总含量。本发明处理方法简单、操作步骤少，分析方法快速、准确，真伪鉴别方法容易、明确。适用于以越橘提取物为原料的保健品、医药品和/或化妆品中越橘提取物的鉴别及其中原花青素含量的测定。

主权项

一种越橘提取物的鉴别及其中原花青素含量的测定方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)供试样品的制备：称取100mg～150mg供试越橘提取物原料于25mL容量瓶中，加入20mL甲醇，超声处理20min～30min，冷却至室温后，加甲醇定容至刻度，摇匀，以4000r/min离心20～30min后，取上清液备用；(2)经水解供试品溶液的制备：将正丁醇与盐酸按95∶5的体积比混合后，制得正丁醇与盐酸的混合溶液，取出18mL正丁醇与盐酸的混合溶液置于具塞锥瓶中，再加入0.6mL硫酸亚铁铵溶液和3mL步骤(1)中制备的试样溶液，混匀，置98℃～100℃沸水浴回流，加热1h后立即置2℃～10℃冷水中冷却，再用10％磷酸水溶液定容至25mL容量瓶中，经微孔滤膜过滤后，即得经水解处理的供试品溶液A；(3)未经水解供试品溶液的制备：取18mL步骤(2)制得的正丁醇与盐酸混合溶液于25mL容量瓶中，加入0.6mL硫酸亚铁铵溶液和3mL步骤(1)中制备的试样溶液，用10％磷酸水溶液定容至刻度，经微孔滤膜过滤后，即得未经水解处理的供试品溶液B；(4)花青素标准品溶液的制备：精确称取10mg矢车菊素标准品于25mL容量瓶中，加入甲醇定容至刻度，摇匀。从中移取2mL于100mL容量瓶中，用10％磷酸水溶液定容至刻度，经微孔滤膜过滤后，即得花青素标准品溶液C；(5)HPLC分析检测：精密吸取步骤(2)制得的经水解处理的供试品溶液A、步骤(3)制得的未经水解处理的供试品溶液B、步骤(4)制得的花青素标准品溶液C各15μL，依次注入高效液相色谱仪，得到高效液相色谱图；(6)越橘提取物真假的鉴别：将步骤(5)所得的未经水解处理的供试品溶液B的高效液相色谱图与国际商务标准SW/T2‑2013中的越橘提取物标准品液相色谱图进行对比，如供试品为假的越橘提取物，则色谱图与越橘提取物标准品色谱图会有明显不同。(7)供试样品中花青素含量的计算：将步骤(5)所得的经水解处理的供试品溶液A、未经水解处理的供试品溶液B及花青素标准品溶液C的高效液相色谱图，按外标法分别计算未经水解处理的供试品和经水解处理的供试品中花青素的含量，二者的差值即为试样中由原花青素水解为花青素的量，从而得出试样中原花青素的含量。供试品中游离花青素含量以质量分数w1计，数值以％表示，按下述公式计算：wj=Aj×Cstd×V1×P×MWjAstd×m1×MWstd×100%]]>w1＝∑wj式中：wj——供试品中各游离花青素组分的质量分数，％；Aj——供试品溶液中各游离花青素组分的峰面积，越橘提取物标准品液相色谱图中峰9，16，18，19，20；Astd——花青素标准品溶液C中矢车菊素的峰面积；Cstd——花青素标准品溶液C中矢车菊素的浓度，单位为mg/mL；m1——供试品的称样量，单位为mg；V1——供试品的定容体积，单位为mL；P——花青素标准品溶液C中矢车菊素的纯度，％；MWj——供试品溶液中相应的游离花青素组分的分子量；MWstd——矢车菊素的分子量。