[发明专利]一种利用抑菌培养基培育拔地拉的组培方法

摘要

本发明涉及一种利用抑菌培养基培育拔地拉的组培方法，包括培养容器消毒、培养基配制、无菌水制备、诱导培养、增殖培养、生根培养和瓶苗移栽。本发明的拔地拉抑菌组培过程中，培养容器和培养基都无需高温高压灭菌，减少了工作量和能源消耗，简化了拔地拉组培技术环节，降低了拔地拉组培成本；而且操作简单，只需按不同的培养基配方配制后即可使用，实用性强，推广性好。本发明的拔地拉抑菌组培方法与常规的拔地拉组培方法相比，可以降低成本10％以上。

主权项

一种利用抑菌培养基培育拔地拉的组培方法，包括培养容器消毒、培养基配制、无菌水制备、诱导培养、增殖培养、生根培养和瓶苗移栽，其特征在于：(1)培养容器消毒：将培养瓶、瓶盖及接种用的塑料盘在100mg/L次氯酸钠+10mg/L环丝氨酸+0.5mg/L十二烷基磺酸钠的水溶液中浸泡不少于10h，保存备用；(2)培养基配制：诱导培养基为MS+2.0～5.0mg/L 6‑BA+0.1～1.0mg/L NAA+40～100mg/L次氯酸钠+0.5～2.0mg/L环丝氨酸+10～50mg/L特美汀+50～100mg/L丙酸钙+30g/L蔗糖+3.0g/L琼脂粉，pH5.8；增殖培养基为：MS+1.0～3.0mg/L 6‑BA+0.1～1.0mg/L NAA+1.0～2.0mg/L KT+40～100mg/L次氯酸钠+0.5～2.0mg/L环丝氨酸+10～50mg/L特美汀+50～100mg/L丙酸钙+30g/L蔗糖+3.0g/L琼脂粉，pH5.8；生根培养基为1/2MS+2.0～5.0mg/L NAA+40～100mg/L次氯酸钠+0.5～2.0mg/L环丝氨酸+10～50mg/L特美汀+50～100mg/L丙酸钙+30g/L蔗糖+3.0g/L琼脂粉，pH5.8；所述MS，为1962年，Murashige和Skoog公开的MS培养基；所述6‑BA，指6‑苄氨基嘌呤；所述NAA，指α‑萘乙酸；所述KT，指6‑糠氨基嘌呤；配制培养基时，先称各培养基配方中的蔗糖和琼脂粉，加培养基总重量1/2的自来水，加热至琼脂粉完全溶解，再按各培养基配方配齐其他原料后，定容，然后用1mol/L的NaOH或1mol/L的HCl调pH值至5.8，分装到消毒过的培养容器中，封口，冷却凝固后备用；(3)无菌水的制备：采用次氯酸钠、环丝氨酸、十二烷基磺酸钠和水配制无菌水，终浓度为100mg/L次氯酸钠、10mg/L环丝氨酸、0.5mg/L十二烷基磺酸钠，现配现用；(4)诱导培养：选择田间生长旺盛无病虫害的拔地拉植株，在茎中部取具有饱满芽点的双芽茎段，洗净，并用800倍稀释的多菌灵浸泡30min，然后用清水洗净后放入恒温水浴锅中，50～52℃热水处理30min，期间不断搅拌使拔地拉茎段受热均匀；然后，取出茎段用无菌泥炭土覆盖，厚度为刚露出蔗芽，保持湿润，并在35～37℃和1500Lx光照条件下培养；待发芽后，取健壮的植株，从最高肥厚带往下30cm处切下，用体积比为75％的酒精表面消毒，剥离外层叶鞘，取含生长点0.5～1.0cm的芽尖，接种到诱导培养基上，30d后可形成大量的丛生芽；培养室温度为26℃，光照12h，光照强度为1500Lx；(5)增殖培养：将诱导出的丛生芽接种到增殖培养基中，丛生芽逐步发育成不具根的幼苗，每15d转接一次，可以达到大量增殖的效果；培养室温度为26℃，光照12h，光照强度为1500Lx；(6)生根培养：当丛生苗长到4～6cm高，且茎杆直径不小于0.2cm时，将丛生苗切成单株，接种到生根培养基上，25d后形成完整植株；培养室温度为26℃，光照12h，光照强度为1500Lx；(7)瓶苗移栽：将生根培养获得的完整植株取出，洗净根部的培养基，用800倍的多菌灵浸泡30min后，移栽至透水性好的基质中，大棚上层用遮光网遮盖，移栽的环境温度为22～28℃；所述透水性好的基质，如草木灰:沙子:耕作土＝1:1:1。