[发明专利]日本漆树高效快速扩繁方法

摘要

本发明涉及植物组培技术领域，具体为一种日本漆树高效快速扩繁方法，通过选取优良日本漆树单株的当年生嫩茎或根萌幼苗进行处理，分别通过启动培养、不定芽诱导、增殖培养、壮苗培养以及生根培养等手段对日本漆树进行高效快速扩繁，该方法启动培养阶段萌发率为96%，不定芽诱导阶段诱导率为65%，增殖阶段使漆树进行快速大量的扩繁，其增殖倍数为4倍，生根率高达89.2%；培养周期短，适合大规模工业化应用。

主权项

1.一种日本漆树高效快速扩繁方法，其特征在于按下列步骤实施：（1）外植体的选择与消毒：选取优良日本漆树单株的当年生嫩茎或根萌幼苗，去除叶柄和叶片，除去表面杂质，用2%的洁儿灭溶液浸泡10分钟，净水冲洗2小时，剪成3‑4cm长含1‑2个腋芽的茎段，75%乙醇浸泡10秒，用1%洁儿灭浸泡1分钟，无菌蒸馏水冲洗2‑3次后，用0.1%升汞浸泡5分钟，无菌蒸馏水冲洗5‑8次，吸干外植体表的残留水分；（2）启动培养：将茎段两端分别切去2‑4mm，平放在启动培养基上，腋芽朝上，启动培养基的配方为： MS+ 6‑BA 2.0mg/L + NAA 0.5mg/L+100mg/L半胱氨酸，30g/L蔗糖，4.5g/L琼脂，pH为5.8‑6.0，置于昼温25±2℃，夜温20±2℃的条件下培养15‑20天后，腋芽处长出1‑2cm高腋芽，再置于光照强度1000‑2000Lux，光照时间12小时/天，昼温25±2℃，夜温20±2℃的条件下光照培养10‑15天；（3）不定芽诱导：待腋芽长到2‑3cm高时，将其从老茎上剪下，去掉底部1‑2个叶片，直立于不定芽诱导培养基上，不定芽诱导培养基MS + ZT0.1mg/L + 6‑BA0.5mg/L，30g/L蔗糖，4.5g/L琼脂，pH为5.8‑6.0，置于昼温25±2℃，夜温20±2℃的条件下培养15‑20天；（4）增殖培养：从基部切取含1‑2个腋芽的茎段，并平放于增殖培养基上，增殖培养基的配方为：MS + ZT0.5mg/L + 6‑BA1.0mg/L +TDZ0.1mg/L，30g/L蔗糖，4.5g/L琼脂，pH为5.8‑6.0；置于昼温25±2℃，夜温20±2℃的条件培养15‑20天后，腋芽基部形成2cm3的愈伤组织，同时腋芽长到3‑4cm；待15天后，待不定芽小苗长到3‑4cm高，再将小苗切下，转到相同的增殖培养基上，经过45天的培养，诱导出的小苗又长到3‑4cm，反复将高3‑4cm的小苗切下进行增殖培养；（5）壮苗培养：茎段腋芽处长出1‑2cm高腋芽，形态学下端也形成1cm3的愈伤组织，壮苗培养基的配方为：MS + TDZ0.2mg/L+NAA0.1mg/L，30g/L蔗糖，4.5g/L琼脂，pH为5.8‑6.0；置于昼温25±2℃，夜温20±2℃的条件培养15‑20天，再置于光照强度1000‑2000Lux，光照时间12小时/天，昼温25±2℃，夜温20±2℃的条件下光照培养10‑15天；（6）生根培养：将3‑4cm高的组培苗转接到生根培养基上，生根培养基的配方为：MS + ZT0.5mg/L + 6‑BA1.0mg/L +TDZ0.1mg/L，0.1‑0.5g/L活性炭，30g/L蔗糖，4.5g/L琼脂，pH为5.8‑6.0；置于光照强度1000‑2000Lux，光照时间12小时/天，昼温25±2℃，夜温20±2℃的条件下光照培养10‑15天后，得到漆树生根苗，生根率高达89.2%。