[发明专利]一种能促进蛋白可溶性表达及提高表达量的重组表达载体

摘要

本申请属于基因工程技术领域，具体涉及一种能促进蛋白可溶性表达及提高蛋白表达量的重组表达载体。重组表达载体pET21b‑HEMBP（Pyr）为原核表达载体，在pET21b的基础上双酶切后，重组连接有HE‑MBP（Pyr）‑TEV序列；具体通过构建重组质粒pUC57‑HEMBP（Pyr）‑Nb、酶切、连接、转化、筛选等步骤构建获得。该重组表达载体在蛋白表达中的应用，可用于表达单克隆抗体、抗原、多聚蛋白、c‑di‑GMP和c‑GAMP合成酶等多种蛋白。本申请通过构建改造、构建新的重组表达载体，可以较好地提高蛋白表达量和提高蛋白的可溶度，在基因工程、蛋白工程中具有较好地实用价值和推广应用意义。

主权项

一种能促进蛋白可溶性表达及提高表达量的重组表达载体，其特征在于，该重组表达载体pET21b‑HEMBP（Pyr）为原核表达载体，通过如下步骤构建获得：（1）构建重组质粒pUC57‑HEMBP（Pyr）‑Nb人工合成HEMBP（Pyr）‑Nb基因序列，其碱基序列具体如SEQ ID NO.1所示，与pUC57质粒进行连接，构建重组质粒pUC57‑HEMBP（Pyr）‑Nb；（2）酶切，连接，具体过程为：将步骤（1）中的重组质粒pUC57‑HEMBP（Pyr）‑Nb与质粒pET21b分别采用NdeI和XhoI进行双酶切；回收酶切产物；将酶切产物进行连接；（3）转化、筛选，具体过程为：将步骤（2）中的连接产物转化至大肠杆菌BL21感受态细胞，进行抗性筛选；挑取阳性单菌落，提取质粒后进行NdeI和BamHI双酶切鉴定；鉴定正确的即为重组表达载体pET21b‑HEMBP（Pyr）。