[发明专利]一种穿心莲多倍体诱导方法

摘要

本发明涉及一种穿心莲多倍体诱导方法，该方法以穿心莲丛生芽为诱导材料，经含有100～2000mg·L^‑1的秋水仙素和1％二甲基亚砜的溶液进行预处理，用无菌水洗干净后，转接到相应培养基继续培养，根据生长状况不断更换培养基，获得多倍体丛生芽，再经生根、练苗培养获得正常生长的植株。本发明首次以穿心莲腋芽组织再生的丛生芽为诱导材料，结合所采用的诱导培养方法，显著提高了穿心莲多倍体的诱导率，高达62.86％，成活率79.05％，以及降低了嵌合体的发生率。获得的穿心莲四倍体叶面积、茎等都较二倍体巨大，有利于提高穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的产量，满足人们对穿心莲药材及其相关产品的需求。

主权项

1.一种穿心莲多倍体诱导方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)无菌苗的培养：将普通穿心莲二倍体种子用0.1％升汞消毒一次，浸泡3min；消毒后的种子用无菌蒸馏水冲洗4～5次；冲洗完的种子在无菌水中浸泡24h备用；将种子接种于初代培养基中培养20～30天，获得无菌苗；(2)丛生芽的诱导：在无菌条件下，将无菌苗的带腋芽茎转接到丛生芽培养基中培养30～45天，获得丛生芽；(3)秋水仙素和二甲基亚砜的处理：在无菌条件下，剪取0.5～1cm长的丛生芽茎尖浸泡于含有100～2000mg·L‑1的秋水仙素和1％二甲基亚砜的溶液中，黑暗条件下振荡12～72h；(4)恢复培养：在无菌条件下，将秋水仙素和二甲基亚砜处理后的丛生芽茎尖用无菌水洗干净，接种于不添加任何激素的MS培养基中培养12～14天后，再接种于丛生芽培养基中培养20～30天，获得多倍体丛生芽；(5)增殖培养：将多倍体丛生芽接种到增殖培养基中进行增殖培养20～25天，增殖培养基为：MS基础培养基+0.5～1.0mg·L‑1KT+0.1～0.3mg·L‑1NAA+30～32g·L‑1蔗糖+6.0～7.0g·L‑1琼脂；(6)多倍体鉴定：取增殖培养后丛生芽的茎尖进行染色体数目观察，在一个根尖上同时观察到5个以上分裂相染色体数目加倍，即可确证该变异株系为多倍体；(7)生根培养：在无菌条件下，将鉴定为多倍体的株系从基部切下，转接到生根培养基中培养15～25天，获得生根苗；(8)炼苗：取出生根苗，转接到装有蛭石、砂子和泥土的盆中，在室内炼苗培养28～40天；(9)移苗：炼苗后，将盆苗移到室外，遮上有70～85％遮阳率的阴棚，培养8～12天后，移去阴棚，进行栽培管理，即可。