[发明专利]多重免疫荧光检测小鼠六种病毒的引物组、试剂盒及方法

摘要

本发明公开了多重免疫荧光检测小鼠六种病毒的引物组、试剂盒及方法。本发明将多重RT‑PCR技术和Luminex液相芯片技术相结合，设计了可同时检测小鼠TMEV、MHV、MNV、Reo‑3、MVM、MPV这六种高感染率病毒的引物组，利用该引物组通过特定PCR获得目标扩增产物，然后将扩增产物、荧光编码微球和链霉亲和素‑藻红蛋白进行杂交，通过Luminex检测仪读取MFI值时，从而分辨不同类型的病毒。该方法具有快速高效、特异性强、灵敏度高、重复性好等有益效果，可应用于实验小鼠的质量监测、流行病学调查及早期预警。本发明灵活性好，可以根据需要在此基础上加减检测病毒的种类。

主权项

1.用于多重免疫荧光检测小鼠TMEV、MHV、MNV、Reo-3、MVM、MPV病毒的引物组，包括7对引物，所述7对引物是通过对7对原始引物进行修饰而成；所述修饰为每对原始引物中的一条原始上游引物的5’端与对应的tag序列的3’端通过间臂连接，另一条原始下游引物的5’端添加生物素标记；所述的原始引物对如下：TMEV原始上游引物：5’-GATCTAAGTYAACCGACTCC-3’，TMEV原始下游引物：5’-GAAGGAAGGGGCAACACATA-3’，MHV原始上游引物：5’-TGGMATCCTCAAGAAGACCACTT-3’，MHV原始下游引物：5’-ATGCCMGAAAACCARGAGTAATG-3’，MNV原始上游引物：5’-TCTGTYCTGCGCTGGGTGC-3’，MNV原始下游引物：5’-GCTGCGCCATCACTCATCC-3’，Reo-3原始上游引物：5’-CCTCGCCTACGTGAAGAAGT-3’，Reo-3原始下游引物：5’-CATCATCGAGTCCCTGGGTG-3’，MVM原始上游引物：5’-TTGTTCCACCACCACTAAATG-3’，MVM原始下游引物：5’-GGTTTGTGTTCAAGATCTAGTTC-3’，MPV原始上游引物：5’-CACCAGCAACAGACAACCAA-3’，MPV原始下游引物：5’-TGAATGCGTTGAGTGTTCTC-3’，内标MS2原始上游引物：5’-CGCAGAATCGCAAATACAC-3’，内标MS2原始下游引物：5’-TAACAATAAGCTCGCAGTCG-3’；所述的tag序列如下：TMEV的tag序列为：5’-TTAAACAATCTACTATTCAATCAC-3’，MHV的tag序列为：5’-CACTTAATTCATTCTAAATCTATC-3’，MNV的tag序列为：5’-TACTTCTTTACTACAATTTACAAC-3’，Reo3的tag序列为：5’-CACTACACATTTATCATAACAAAT-3’，MVM的tag序列为：5’-TACTACTTCTATAACTCACTTAAA-3’，MPV的tag序列为：5’-ACTTATTTCTTCACTACTATATCA-3’，内标MS2的tag序列为：5’-ATTAAACAACTCTTAACTACACAA-3’。