[发明专利]一种胰蛋白酶制备方法在审
| 申请号： | 201710047107.5 | 申请日： | 2017-01-20 |
| 公开（公告）号： | CN106754842A | 公开（公告）日： | 2017-05-31 |
| 发明（设计）人： | 周爱武;张飞 | 申请（专利权）人： | 上海交通大学医学院 |
| 主分类号： | C12N9/76 | 分类号： | C12N9/76;C12N15/70 |
| 代理公司： | 上海翼胜专利商标事务所(普通合伙)31218 | 代理人： | 翟羽 |
| 地址： | 200025 *** | 国省代码： | 上海;31 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | 本发明公开了一种胰蛋白酶制备方法，即利用Psumo3‑AMP载体将Sumo3标签蛋白第92位甘氨酸后连接胰蛋白酶的第24位异亮氨酸，过表达胰蛋白酶融合蛋白形成包涵体，然后将包涵体清洗、溶解和复性，最后将胰蛋白酶激活和纯化。本发明的优点在于(1)利用基因工程原理，利用大肠杆菌表达重组的胰蛋白酶，原料来源明确，蛋白质量可控；(2)采用Sumo3融合蛋白形式，经特异性高的Sumo特异性蛋白酶2(SENP2)切除Sumo3标签得到有生物活性的胰蛋白酶，本方法中胰蛋白酶的激活速率可控，折叠效率高且所得蛋白均一性好。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 胰蛋白酶 制备 方法 | ||
【主权项】：
一种胰蛋白酶制备方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)胰蛋白酶表达载体的克隆构建：利用Psumo3‑AMP载体将Sumo3标签蛋白第92位甘氨酸后连接胰蛋白酶的第24位异亮氨酸；(2)过表达胰蛋白酶融合蛋白形成包涵体；(3)胰蛋白酶融合蛋白包涵体的清洗、溶解；(4)胰蛋白酶融合蛋白包涵体的复性：复性液的组分为1.5‑2.5M尿素，30‑100mM三羟甲基氨基甲烷PH 8.5，10‑20mM还原型谷胱甘肽或者半胱氨酸，1‑5mM氧化型谷胱甘肽或者胱氨酸；(5)胰蛋白酶的激活和纯化：充分复性后，经阳离子交换层析纯化出正确折叠的融合蛋白Sumo3‑trypsin，经过Sumo特异性蛋白酶2切去Sumo3标签蛋白，经过镍亲和层析纯化出有生物活性的胰蛋白酶。
下载完整专利技术内容需要扣除积分，VIP会员可以免费下载。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于上海交通大学医学院，未经上海交通大学医学院许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/patent/201710047107.5/，转载请声明来源钻瓜专利网。
