[发明专利]桑葚病原菌高通量鉴定及种属分类方法及其应用

摘要

本发明公开了一种桑葚病原菌高通量鉴定及种属分类的方法。本发明通过收集桑葚病果；提取桑葚病果的总DNA；Illumina DNA文库构建；Illumina高通量测序；去除测序数据中桑树基因组序列；组装微生物基因组序列；组装完整核糖体DNA序列；筛选标记微生物核糖体DNA序列；对比分析核糖体DNA序列进行种属分类，实现对桑树病原菌的鉴定及种属分类。结果显示，运用本发明方法对桑葚菌核病病原菌进行鉴定及种属分类，共鉴定出3种真菌，其中相对丰度最高的为Ciboria属病原菌，据此确定桑肥大性菌核病病原菌为Ciboria，并根据比对结果，确定其为Ciboria carunculoides；该属大多数为植物病原菌，可导致植物的果实、种子出现僵化、膨大等症状，与研究的桑葚菌核病的病征相符合。

主权项

一种桑葚菌核病病原菌高通量鉴定及种属分类方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：S1.收集桑葚病果；S2.提取桑葚病果的总DNA；S3. Illumina DNA文库构建；S4. Illumina高通量测序；S5.去除测序数据中桑树基因组序列；S6.组装微生物基因组序列；S7.组装完整核糖体DNA序列；S8.筛选标记微生物核糖体DNA序列；S9.对比分析核糖体DNA序列进行种属分类；步骤S2所述提取桑葚病果的总DNA的方法为：剪取桑病果中的患病区域，加入液氮充分研磨，用真菌DNA提取试剂盒提取病果总DNA，所述总DNA保存于‑20°C冰箱；步骤S3所述Illumina DNA文库构建的方法为：依照 Illumina 文库构建流程，将所述步骤S2中所述总DNA构建为片段大小400~600bp的双末端高通量测序文库；步骤S4所述Illumina高通量测序的方法为：用Illumina Hiseq 2500测序仪对所述步骤S3中所述DNA文库进行高通量测序。